間接膠乳凝集試驗

實驗概要

        以膠乳顆粒為載體，將抗原吸附在載體上制備成致敏載體顆粒，用以檢測標本中未知抗體的方法，稱之為間接膠乳凝集試驗。         本實驗以類風濕因子（Rheumatic factor   RF）測定為例。RF是一種發生于類風濕病人血清中的抗人變性IgG的自身抗體（血清中以IgM結構為主），此種自身抗體可與IgG的Fc段呈特異性凝集反應。將變性IgG致敏膠乳顆粒（羧化聚苯乙烯膠乳），使其吸附在膠乳顆粒載體上，當待檢血清中含有RF時，致敏膠乳顆粒上變性IgG與相對應的抗體兩者相遇，即可發生凝集現象。

主要試劑

1．類風濕免疫診斷試劑盒：人變性IgG致敏的膠乳顆粒，陽性血清，陰性血清。

2．標本：被檢血清56℃30分種滅活，可阻止假陽性凝集。

3．生理鹽水。

主要設備

        毛細管、刻度吸管、試管、牙簽、黑色方格反應板、微量震蕩器等

實驗步驟

【操作方法】

1．先用生理鹽水將被檢血清、陽性血清、陰性血清做1:20稀釋。

2．于黑色反應板上取三個方格，用毛細管分別加1:20被檢血清、陽性、陰性血清各1滴。

3．于各方格內分別加膠乳試劑各一滴（每滴約0.05ml）。

4．立即旋轉搖動玻板或用微量震蕩器震蕩，使兩者充分混勻，3分鐘內觀察結果。

【結果觀察】

1. 陽    性：    3分鐘內出現明顯而均勻的凝集顆粒、液體澄清者；

2. 陰    性：    3分鐘內不凝集、仍保持均勻乳膠狀者。

3. 定量測定：可將血清作倍比稀釋，重復上法測定，以出現凝集的血清最高稀釋度為RF的滴度。

【結果評價】

        此法操作簡單，結果清晰可見，容易判斷，敏感性高與血凝試驗，但特異性稍差。

【臨床意義】

        主要用于類風濕性關節炎的輔助診斷。此類病人RF陽性檢出率達70%，但應注意，某些疾病如：全身性紅斑狼瘡、染性單核細胞增多癥心內 膜炎、結核、梅毒、病毒感染、腎移植等，以及一些老年人可有類風濕因子水平增高的表現。 

注意事項

1．每次實驗均應設陽性與陰性對照。

2．稀釋待測血清：因為血清中IgG濃度過高可抑制反應的發生，血清中白蛋白及其它蛋白亦有妨礙反應的作用，所以試驗前需適當稀釋待測血清。

3．膠乳試劑應保存在4℃，不得冰凍；用前要充分搖勻；反應以室溫為宜。

4．血清和試劑的液滴要大小一致。

5．觀察時應排除特異性凝集的可能，要與陽性、陰性比較。