阿須貝氏培養基分離好氧性自生固氮菌_選擇性培養法

選擇性培養是一類根據某微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養，具有使混合菌中的劣勢發展成優勢菌的功能，故被廣泛用于菌種篩選等領域。阿須貝氏（Ashby）無氮培養基是一種缺之結合態無機或有機氮源的培養基，可有效從土壤中分離自生固氮菌。阿須貝氏（Ashby）無氮培養基選擇的原理是自生固氮菌在保證碳源（甘露醇或葡萄糖）和無機營養供應的情況下，可利用空氣中的游離氮合成自身需要的含氮有機物，而其他各類微生物多無自生固氮能力，因此達到了選擇性富集的效果。

阿須貝氏無氮培養基土

水甘露醇KH2PO4NaClCaSO4?2H2OCaCO3蒸餾水瓊脂粉

培養皿吸管研缽接種環三角瓶載玻片

一、 采集土樣

用小鏟鏟取稍干的10 cm深和20 cm深的土壤樣品約1克，適當研碎；
 

二、 準備平板

將阿須貝氏培養基加熱融化，待冷至50 ℃左右倒數個平板，冷卻待用；
 

三、紙板布土

將土樣倒在約15 cm×15 cm 大小的毛面硬紙板上，搖動幾下，輕輕倒去顆粒較大的土樣；
 

四、彈土接種

把紙板沾土的面朝向平板并蓋上,隨即用手輕輕彈數下.然后移去紙蓋上皿蓋；
 

五、保溫培養

將培養皿平板倒置后放入28 ℃恒溫中培養4-7 d；
 

六、觀察菌落

凡出現大型、黏稠、半透明，顏色呈白色、褐色或黑褐色的菌落，一般都是好氧性固氮菌。
 

七、分離純種

可用平板劃線分離法進行菌種純化。