降鈣素原（PCT）的標準化

降鈣素原在了解患者有無細菌感染和敗血癥等問題上，具有非常特殊的價值。目前，國內為了減少抗生素的使用，更加關注諸如降鈣素原（PCT）檢測的項目。為此，國內許多廠商紛紛自行開發或引進這個檢測試劑。

一、降鈣素原應用的歷史

降鈣素原是一個116個氨基酸的多肽，它是調解體內鈣濃度激素的前體。盡管近期對降鈣素原的興趣集中于它作為細菌感染標志物的價值，這個多肽最初用于癌癥的血清標志物。1970年代，多個研究者注意到在神經內分泌腫瘤患者的血清中，該成熟激素降鈣素在循環中水平升高。這個升高也發現于甲狀腺髓樣癌、良性腫瘤、和肺部的小細胞癌患者。降鈣素接著被用于隨訪患者接受治療效果的血清標志物。很快，發現降鈣素的前體，包括降鈣素原在神經內分泌腫瘤的患者中也升高，可等同地被作為癌癥的血清標志物。

1990年代，注意到具有嚴重全身性炎癥患者血清降鈣素原濃度的升高，包括燒傷中吸入性傷害、肺吸入、胰腺炎和中暑等。

1993年，Assicot和同道報告了嚴重細菌感染兒童血液中降鈣素原的高濃度。在這個里程碑的預期研究中，從79例疑似感染的住院兒童中確定了降鈣素原的價值。86%病毒性感染的兒童，他們的降鈣素原依然保持較低的水平（0.1~1.5μg/L），在細菌感染兒童中降鈣素原為6~53μg/L。另外，降鈣素原與疾病嚴重性和接受抗生素治療快速下降相關。在這個標志性的報告后，降鈣素原很快被認可為成年人和兒童二者細菌感染的有價值標志物。

二、ISO 17511規定了5種計量可溯源鏈的上端

1、測量結果可以在計量上可溯源至SI的被測量。有可用的一級參考測量程序和一個或多個（經認證的）一級參考物質（作為校準品）。達到這樣水平的有約25～30個類型的量，具有良好確定的組分，如：一些電解質、代謝物、甾體激素及一些甲狀腺激素等。

2、測量結果不能在計量上可追溯至SI的量。

1）有可用的國際約定的參考測量程序（不能被稱為一級參考測量程序），和一種或多種用此參考檢測測量定值的國際約定校準物質。符合這些條件的量的組分，像HbA1c（糖化血紅蛋白）。

2）有可用的國際約定參考測量程序，但是沒有國際約定校準物質。符合這些條件的約有30種類型組分的量，如：凝血因子。

3）有可用的一個或多個國際約定校準物質（用作校準品）及賦值方案，但是沒有國際約定參考程序。符合這些條件的約有300多種量，如：使用世界衛生組織（WHO）國際標準的量，像蛋白激素、某些抗體和腫瘤標志物等。

4）既無參考測量程序，也無校準的參考物質可用。制造商自行建立“自用”測量程序和校準品，為產品校準品定值。符合這些條件的約有300種組分的量，如腫瘤標志物和抗體等。

由于，至今國際上還沒有公認的降鈣素原參考物質或參考測量程序（方法），制備廠商只能自行建立“自用”的測量程序和一級校準品，為公司的產品校準品定值。BRAHMS公司對降鈣素原的校準做法，正是ISO 17511導則規定了溯源鏈上端中的最后一個這樣的做法，很具有特點。

三、BRAHMS建立的降鈣素原一級校準品PTN47和新的第二代校準品PCT115

為了使公司降鈣素原第一代產品（LUMItest PCT）確保對患者樣品檢測結果的持續可靠，在該第一代產品進入市場前，公司自行建立了降鈣素原的一級參考制品-PTN47。

1、第一代參考物質PTN47

PTN47是一個合成多肽，僅47個氨基酸組成。這個多肽是完整降鈣素原蛋白的一部分。它在BRAHMS的LUMItest PCT產品（2h）中，是PCT-標準的原始標準物質。對PCT47采用稱量法和容量法配制成作為降鈣素原檢測的標準溶液（校準品）[為了使PTN47的量可以代表完整的降鈣素原的量，在稱量前換算出多少PTN47相當于真實降鈣素原的量，再進行稱量配制]。BRAHMS公司聲明該標準可代表完整降鈣素原分子。標準被稱為“Urstandard PTN-47”，意即“金標準”。需要注意的是，使用PTN47作為一級校準品以及以后的產品校準品，均只用于公司的第一代LUMItest PCT產品。

2、第二代參考物質PCT115

今天，參考制品PCT115是最高級可用標準，由BRAHMS GmbH以基因重組技術制備，通過N-端氨基酸序列（Edman降解方法）和質譜分析確定純度和含量。通過對一級校準品的系列稀釋液體，經檢測得到的實際檢測值與理論稀釋值的回歸分析，實際檢測值與理論預期結果比較最大偏差在5%之內為可接受。PCT115是新的“金標準”物質，用于所有下列標準產品的校準。

3、PCT115參考值的確定

由于PCT115為115個氨基酸的多肽，在參與降鈣素原的免疫檢測中，出現了與PTN47完全不等的免疫反應活力，為了要確保公司不同產品間對相同患者樣品的檢測結果一致，不可以使用稱量法和容量法確定的PCT濃度含量作為檢測方法的校準值。也不可在以后產品上直接以PTN47直接進行校準。考慮到PCT115與患者樣品中降鈣素原多肽最為接近，今后必須使用PCT115作為校準品；但最早產品已經使用了PTN47作為一級參考物質，產品已經用于市場。為了確保所有各代產品對相同患者的檢測具有相同的結果，必須永遠以PTN47與LUMItest PCT的組合，作為公司的一級檢測系統；今后， LUMItest PCT第一代產品和發展的各代產品，在與PCT115的組合中，必須通過真實患者樣品的比較，去校正PCT校準品的校準值以及實際使用的校準曲線。經校正的校準曲線還必須再次使用真實患者樣品，進行方法學比較予以驗證，確認各代產品與PCT校正后的校準值的組合，和LUMItest PCT與PTN47組合，在真實患者樣品比對符合要求后，方可投入市場。實際校正后的各代產品，它的校準曲線真的是一條曲線，不是直線。由此確保了BRAHMS各代產品對患者樣品檢測結果的互換性。

4、量值傳遞過程

在將PTN47與LUMItest PCT組合的結果傳遞給新的PCT115與LUMItest組合中，以PTN47原先的標準樣品S3（2μg/L）為準。依據S3，計算出PCT115范圍其他標準的理論濃度。這個PCT115在溯源過程中是公司的一級校準品。

使用Passing Bablok回歸進行分析，對PTN47與LUMItest組合（x）與PCT115與LUMItest組合（y）的兩個方法進行比較。在對347例相關血清檢測時，在完整的檢測范圍內具有良好關聯（y=1.01x +0.05μg/L）。由此確定了這兩代校準物質的互換性。

今天，BRAHMS公司在任何一代降鈣素原檢測產品中均使用了PCT115為校準品。但是，必須懂得，這個校準傳遞是以最原始的PTN47為準的。

四、我們的認識

1、BRAHMS降鈣素原產品上述的校準做法，是ISO 17511導則在體外診斷產品實現溯源性的具體體現。目前，大多具有溯源性的各個體外診斷產品，均具有國際認可的參考物質或參考檢測程序。對于諸如降鈣素原這樣的體外診斷產品，按照溯源要求需要自行建立“參考物質”或“參考檢測程序”，在體外診斷產品中還很少見。BRAHMS公司的降鈣素原產品溯源建立過程，應該是一個典型做法。它既有自己的一級校準品（參考物質）、又具有自己的溯源校準傳遞做法。所有一切全部是為了確保患者樣品檢測結果在使用公司產品系列中得到一致性。

2、目前國內許多降鈣素原的產品宣傳具有溯源性。必須指出，與BRAHMS產品比對的相關性并不代表具有溯源性，因為這僅僅是進行的方法學比較。按照ISO 17511要求，在第一章中指出：c) 在相同的計量水平下，測量相同量的兩個測量程序的測量結果具相關性，但是這樣的“水平”相關不提供計量可追溯性。何況，比對具有的相關系數盡管接近1，但是比對的回歸關系中存在著明顯的斜率小于1、還有顯著截距等，均說明比對間存在著顯著誤差。3、如果直接使用購買的降鈣素原（116個氨基酸的多肽）為公司的一級校準品，如果校準過程得當，也可以認為該公司的產品建立了溯源性。可是，由于上述BRAHMS公司建立的溯源過程，是從PTN47（47個氨基酸的多肽）開始確定了他們的溯源關系的。可以猜測，與BRAHMS公司的結果會有差異。但是，國內降鈣素原產品的公司直接使用由BRAHMS公司建立的0.5μg/L和2μg/L判斷限值，應該講是有問題的。不經過具體的大量臨床試驗，實在無法得到可靠的判斷限值，必將在臨床應用上產生嚴重問題。