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  • 發布時間:2020-08-24 10:54 原文鏈接: 霉菌的形態觀察實驗

    實驗方法原理 霉菌自然生長狀態下的形態,常用載玻片觀察,此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養基上,培養后用顯微鏡觀察。此外,為了得到清晰、完整、保持自然狀態的霉菌形態還可利用玻璃紙透析培養法進行觀察。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性,將霉菌生長在覆蓋于瓊脂培養基表面的玻璃紙上,然后將長菌的玻璃紙剪取一小片,貼放在載玻片上用顯微鏡觀察。

    實驗材料 曲霉青霉根霉毛霉

    試劑、試劑盒 乳酸石炭酸棉藍染色液甘油查氏培養基平板馬鈴薯培養基

    儀器、耗材 載玻片蓋玻片U形棒解剖刀玻璃紙濾紙

    實驗步驟

    1.  一般觀察法

    于潔凈載玻片上,滴一滴乳酸石炭酸棉藍染色液,用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中,再細心地將菌絲挑散開,然后小心地蓋上蓋玻片,注意不要產生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察,必要時再換高倍鏡。


    2.  載玻片觀察法


    (1)將略小于培養皿底內徑的濾紙放入皿內,再放上U形玻棒,其上放一潔凈的載玻片,然后將二個蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端,蓋上皿蓋,把數套(根據需要而定)如此裝置的培養皿疊起,包扎好,用1.05 kg/cm2,121.3℃滅菌20分鐘或干熱滅菌,備用。


    (2)將6~7 ml 滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養基倒入直徑為9 cm 的滅菌平皿中,待凝固后,用無菌解剖刀切成0.5~1 cm2的瓊脂塊,用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養皿內的載玻片上,每片上放置2塊。


    (3)用滅菌的尖細接種針或裝有柄的縫衣針,取(肉眼方能看見的)一點霉菌孢子,輕輕點在瓊脂塊的邊緣上,用無菌鑷子夾著立在載玻片旁的蓋玻片蓋在瓊脂塊上,再蓋上皿蓋。


    (4)在培養皿的濾紙上,加無菌的20%甘油數毫升,至濾紙濕潤即可停加。將培養皿置28℃培養一定時間后,取出載玻片置顯微鏡下觀察。


    3.  玻璃紙透析培養觀察法


    (1)向霉菌斜面試管中加入5 ml 無菌水,洗下孢子,制成孢子懸液。


    (2)用無菌鑷子將已滅菌的、直徑與培養皿相同的圓形玻璃紙覆蓋于查氏培養基平板上。


    (3)用1 ml 無菌吸管吸取0.2 ml 孢子懸液于上述玻璃紙平板上,并用無菌玻璃刮棒涂抹均勻。


    (4)置28℃溫室培養48小時后,取出培養皿,打開皿蓋,用鑷子將玻璃紙與培養基分開,再用剪刀剪取一小片玻璃紙置載玻片上,用顯微鏡觀察。


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