青霉素不耐酸，不宜口服。肌內注射后，0.5小時達血藥峰濃度（Cmax），可廣泛分布于組織、體液中，易透入有炎癥的組織，胸、腹腔和關節腔液中濃度約為血清濃度的50%。本品可通過胎盤，但難以透過血．腦脊液屏障，乳汁中可含有少量青霉素，不易透入眼、骨組織、無血供區域和膿腔中。血漿蛋白結合率為45%～65%，血消除半衰期（t1/2β）約為30分鐘，腎功能減退者可延長至2.5～10小時，老年人和新生兒也可延長。本品約19%在肝內代謝，主要通過腎小管分泌排泄，腎功能正常情況下，約75%的給藥量于6小時內自腎臟排出，亦有少量經膽道排泄。血液透析可清除本品，而腹膜透析則不能。