細胞介導的免疫反應（cell mediated immune，
CMI）在機體抗感染及抗腫瘤免疫、移植排斥反應和自身免疫病中發揮重要的作用。CMI的主要效應細胞之一為細胞毒T淋細胞（cytotoxic T
lymphocyte，CTL）。目前在醫學基礎與臨床研究中重視CTL活性測定，將其作為了解機體細胞免疫功能和探索疾病機理的重要方法之一。
經文學事業上的資助者的CTL活性測定方法為51鉻（Cr）釋放法，本法結果準確、重復性好，但也存在以下不足：
1、使用放射性的51Cr不利于安全操作及廢物處置，且需特殊測定儀器；
2、51Cr自發釋放率高，常因不同靶細胞標記效率變化差別大而影響結果判定；
3、51Cr半衰期（27.8天），無法用于需多次測定的動物試驗；
4、細胞共育時間短而試驗操作步驟多，不能在單個細胞水平進行測定。因此多年來人們一直試圖尋找可以替代51Cr釋放法的CTL活性測定方法，如采用熒光標記、流式細胞分析和報告基因等技術的靈敏可靠、簡單易行的非同位素測定法。
一、熒光測定法
1、定法
（1）alamarBlue一步熒光測定法
alamarBlue為活細胞代謝指示劑，易溶于水，進入細胞后經線粒體酶促還原產生熒光及顏色變化，可用以定量。具體測定方法是：在靶細胞孔（T）、效應細胞孔（E）和實驗孔（T+E）各加alamarBlue，共育6~24h后用板式熒光測定儀測530nm（發射）/590nm（散射）波長熒光強度，將T及E孔熒光均值相加后減去實驗孔（T+E）熒光均值，與T孔熒光均值比較即可計算CTL對靶細胞的溶解%。本法與51Cr釋放法紡織廠較有以下特點：
①特異性相當但靈敏度更高，重復性好，組內及組間差異很小。
②使用方便，無需預先標記靶細胞及離心和洗滌步驟，適用于大批量樣品的高準確性自動測定。
③alamarBlue的使用濃度不影響細胞正常代謝及基因表達，可在無菌條件下測定后繼續培養擴增細胞，有利于對培養細胞的連續監測及深入研究。
④還可測定淋巴細胞增殖或化學物質的細胞毒性及細胞凋亡。
⑤多種粘附或非粘附細胞系、細菌、真菌等可用作靶細胞，所需效應細胞數較少（3×105/孔即可）。
⑥含胎牛血清（FCS）及酚紅的培養液也不干擾測定結果。
（2）Calcein-AM熒光掃描測定法
Calcein
acetoxymethy1酯（Calcein-AM）是一種胞漿熒光標記物，本身無熒光，滲入細胞后細胞內酯酶催化生成的水溶性綠色熒光物質不易透出細胞。靶細胞用其標記后與效應細胞共充，再加Fluoro-Quench試劑（一種以Ca2+螯合的小牛血紅蛋白主要成分、還含溴化乙啶試劑，它對細胞無毒，不能進入活細胞但可能進入膜已破損的死細胞），淬滅培養液中的熒光，在板式熒光掃描儀上定量測定活細胞內的熒光強度，與靶細胞對照孔（代表細胞100%存活）比較。即可計算效應細胞殺傷靶細胞%。本法簡便可靠，無南收集和轉移培養上清，重復性高，變異性小，測定數據自動輸入計算機，適于大批量測定；可測CTL、LAK及NK細胞活性，還可在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下直接觀察細胞。不足的是對某些高核漿比的細胞染色效果不太好；Calce-in-AM在高濃度時可能損害細胞功能。