飛速發展的創新團隊多方位特色的質譜平臺

　　——訪第二炮兵總醫院質譜檢測中心

　　【導語】成功舉辦了25期的質譜沙龍，已經成為一線質譜技術人員交流的品牌陣地，這里面尤其要感謝堅持組織活動的第二炮兵總醫院質譜檢測中心;而這個創辦于2006年3月的質譜中心，在短短的不到4年的時間里，取得的成績也令人驚嘆：

　　成立2個月，他們建立了中毒急救中心，在國內首先開展了LC-MS/MS快速多目標篩查300種中毒藥物的方法。

　　成立3個月，他們獲得了Ⅰ期藥物臨床試驗的資格。

　　2008年，他們在國內首家成功建立了定量檢測人體內44種氨基酸的準確方法，為氨基酸疾病的臨床檢測建立了新標準。

　　中央臺科技之光曾報道了他們的事跡——“關于二炮醫院肝移植”，他們在“個體化”給藥方面再次做出開創性的工作，使一個肝癌晚期的患者在肝移植術后15天就康復出院。

　　他們成功開發出“他克莫司檢測試劑盒(液相色譜-串聯質譜法)”，將使“個體化”給藥方法給更多患者帶來福音。

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　　在驚嘆于他們的事跡同時，我們走進了第二炮兵總醫院質譜檢測中心，通過質譜一線技術專家李鵬飛老師的講述，向我們揭開他們快速發展的秘笈。

　　第二炮兵總醫院質譜檢測中心 李鵬飛老師

　　搭建多方位特色的質譜檢測平臺

　　據了解，二炮總醫院的質譜檢測中心2005年底才購進他們的第一臺Qtrap 3200型質譜，2008年因工作量大，購進第二臺同型號質譜。作為質譜檢測中心，他們起步并不早，他們的質譜儀器也不多，我們看到的是2010年春節前的第三天，他們的質譜還在滿負荷運轉。很難相信，就是憑這兩臺儀器，他們做出了諸多的成績。用李老師的話來說，“我們搭建了多方位特色的質譜檢測平臺。”

　　Agilent1100- 3200 QTrap液質聯用儀

　　UltiMate 3000- 3200 QTrap液質聯用儀

　　(一)國內第一家：用LC-MS/MS快速多目標篩查中毒藥物

　　以前我們了解的中毒檢測、應急分析單位，大致都設在公安法醫部門，或者是疾控部門，前者為了判定犯罪，后者為了在重大的食品/藥品/環境等安全事故中判定中毒原因。換言之，在2006年以前，如果一個個體，因服用未知藥物昏迷不醒，或者是長期用藥、不合理用藥出現肝/腎功能障礙，當被送到醫院后，醫生們將會因無法快速判定其中毒原因，而貽誤救治最佳時機。

　　二炮總醫院質譜檢測中心組建之前，首先掛牌了 “中毒急救中心”，成立之初，他們的目標就是要打破常規，用最快速的方法對病人進行中毒藥物篩查，判定病因，讓臨床醫生“對癥下藥”。目前醫院使用的常用藥物超過上千種，常見容易引起急慢性中毒的藥物超過300種，而LC-MS/MS(液質聯用)由于檢測速度快、定性定量能力強，因此成為他們的首選儀器。同時，他們也招募了液質聯用的專業人才——從師于著名的藥物代謝研究專家顧景凱教授、從2002年就開始結緣液質聯用的李鵬飛老師。在大家齊心協力的攻關下，他們很快開發出了LC-MS/MS快速多目標篩查中毒藥物的方法，該方法可同時定性定量，分析時間小于兩小時。現已建立了1200種化合物的質譜庫，其中包含大于300種常見藥物的質譜庫。目前，他們已成功篩查中毒急救樣品400例次，為中毒患者的臨床搶救提供了重要依據，挽救了上百病人的生命。通過對中毒急救患者中毒性況回顧性分析，他們得到了多項具有臨床指導意義的結論。

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　　(二)器官移植個體化給藥方法 20天內讓術后病人康復出院

　　器官移植已成為挽救終末期臟器功能衰竭患者生命的最有效治療手段，術后的抗排斥反應以及存活率是最大障礙。在過去20多年里，醫藥專家一直都在研究和探索臨床“個體化給藥方式”。在首創了用LC-MS/MS快速篩查中毒原因、為臨床中毒急救提供決策依據的方法后，他們的團隊開始攻克器官移植個體化給藥方法的難關。

　　2007年年底，《光明日報》、《科技日報》、《健康時報》、《中國醫藥健康指南》等主要媒體幾乎在同一時間披露了一條消息：二炮總醫院藥學部在我國首次研究提出從藥物代謝酶基因型制訂中國人免疫抑制劑的個體化給藥方式，為3名肝移植術后患者實行“個體化”用藥期間，既無任何排異反應，又避免了藥物毒性發生，收到了滿意的效果，15天~20天康復出院。

　　隨后，中央臺科技之光欄目詳細報道了感人的事例：一位56歲的肝癌晚期患者，在二炮總醫院進行了肝臟移植手術，二炮藥學部測定了他的FK506藥物基因型屬于慢代謝型，設計初步的給藥方案，確定取血樣時間，并用液質聯用全程監測免疫抑制劑他克莫司的血藥濃度，隨時調整給藥方案，病人術后15天即奇跡般地康復出院。，而采用傳統方案，患者一般則需幾個月，甚至一年才能恢復。借用我國第一個遺傳藥理學院士、中南大學臨床藥理所周宏灝院士的話來評價：“這一研究在國內乃至國際的臨床藥學工作中具有開拓性的意義。”

　　此后，他們乘勝追擊，成功地開發出他克莫司檢測試劑盒(液相色譜-串聯質譜法)”，它的推廣應用將有助于提高FK506檢測質量、促進檢測方法標準化和規范化，同時還可以降低檢測成本，使臨床FK506血藥濃度的監測更為快捷、準確、可靠。目前已報批完成，很快就將上市。李老師在這里非常自豪地說到，國內首個試劑盒從調研做方法到SFDA批準花費了近5年的時間;而二炮總醫院研制的FK506血藥濃度檢測試劑盒從07年初至09年10月，僅僅用了不到三年的時間便拿到了SFDA批準文號。

　　注：他克莫司(tacrolimus，簡稱FK506)是日本藤澤公司1984年發明的新型免疫抑制劑，臨床可有效預防器官移植后急性排斥反應和逆轉難治性排斥。目前FK506已廣泛用于在肝、腎、心、胰等器官移植中抗排斥及自身免疫系統相關疾病的治療。但是，FK506的血藥濃度與免疫抑制強度和毒副反應相關，藥動學個體差異大。臨床治療中，血藥濃度低患者會因未達到有效治療濃度產生急性排斥反應;血藥濃度高則會產生如肝腎毒性、血糖代謝紊亂等一系列毒副反應，因此，臨床使用FK506需要進行血藥濃度監測。

　　第二炮兵總醫院研制的他克莫司檢測試劑盒

　　(三)把握新技術趨勢 實現全譜氨基酸快速檢測

　　說到氨基酸分析，大家都知道用氨基酸分析儀，原理是：基于陽離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測定的離子交換色譜法(IEC)。這項技術從1958年發明到現在已經使用了半個世紀，但其只可以測定16種氨基酸的含量，對人體氨基酸的檢測顯得力不從心。2008年開始，二炮總醫院質譜檢測中心在與國外實驗室交流的基礎上，在國內首次成功建立了25分鐘內定量檢測人體內44種氨基酸的準確方法。這種方法借鑒了蛋白質組學中常用的iTRAQ試劑和液質聯用結合的方法，可同時檢測氨基酸的種類更多，方法更為快速簡便(25分鐘)，準確度更高(同位素內標)。在掌握了大量實驗數據的基礎上，他們已初步建立起適用于中國人群的正常血氨基酸水平;然后開發了相應的標準化檢測流程和軟件《全譜氨基酸營養代謝組學分析系統》，可以明確地根據直觀圖表判斷體內的氨基酸水平，提供個體的營養、代謝、健康狀況，并提供相應的改善意見，給眾多疑難雜癥病患者再次帶來了福音。而且，一些農業、飼料行業單位也開始同他們合作。筆者在此也大膽猜想，使用LC-MS/MS技術替代傳統氨基酸檢測方法非常有可能成為未來的發展趨勢。

　　氨基酸檢測報告

　　本網收錄前沿Lab：第二炮兵總醫院質譜檢測中心

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　　探究成功奧秘

　　在如此短的時間，隸屬于二炮總醫院藥學部的質譜檢測中心就取得如此令人咋舌的成績，大家一定想知道成功背后的原因。我們試圖從這個一線技術人員身上一探究竟，不一定最能綱舉目張，但一定會有很多感性的啟發。

　　發揮優勢 緊跟科研

　　李老師指出的第一條就是——“在劉麗宏主任帶領下的領導團隊特別有思路，她/他們緊跟科研動態，不斷地引進新技術、新思路，帶動整個團隊不斷向前發展，從最初發揮醫院單位優勢為臨床檢測服務，發展成為如今建立多個國內首家檢測平臺。” 第二條是，“在基層醫院單位，可以更清楚地了解臨床所需，更方便地拿到病人的檢測樣本，更有利于開展科研的實踐。”

　　二炮總醫院藥學部主任 劉麗宏博士

　　質譜檢測中心的研究宗旨是：通過為臨床服務、加強科研創新、擴大成果轉化，建設特色質譜檢測服務。除開創了中毒篩查、全譜氨基酸檢測、個性化給藥的新思路、新方法外，他們還參與了各項新穎的科學研究如：結直腸癌脂類組學腫瘤早期診斷新技術的研發(863課題 2006AA02Z4A6)，體內診斷生物標記物;環境中8種雌激素的檢測工作(973課題海河項目)。

　　要是用最簡單的專業詞匯總結出他們科研的特色，就是——小分子定量，力爭把小分子定量做成全國較“牛”的單位，并不斷探索小分子藥物作用的機理。

　　這種勇氣很讓筆者佩服!很多人知道，近年來科研學術的熱點在生命科學相關領域，很多人總認為一提生命科學，就是多肽、大分子、蛋白質。其實，目前絕大部分藥物都屬于小分子，在臨床應用上仍有大片待開發的處女地。比如，花幾天功夫測出一個藥物是什么并不難，但要在兩個小時內篩查中毒病人的致病藥物，快速指導醫生挽救病人，就不容易。氨基酸檢測絕對是屬于生命科學范疇，但要在25分鐘內判定病人體內到底是哪種氨基酸缺乏，也不容易。“他克莫司”個體化給藥的臨床研究，協助二炮總醫院肝臟移植技術水平達到全國領先，他們已完成近30例原位肝移植手術，取得了無一手術死亡及相關外科并發癥的佳績。二炮總醫院的質譜中心，立足“小分子定量”的臨床應用科研，一次又一次，開創了用實驗室檢測技術指導臨床實踐的先河。

 

　　寶劍鋒從磨礪出 梅花香自苦寒來

　　創新的思路是成功的基石，不怕困難、扎實肯干、一絲不茍的態度正是成功的保證。

　　醫院中毒急救中心是24小時值班的，只要接收到相關病人，無論多晚，從劉麗宏主任到李鵬飛等老師都會立刻趕到醫院，針對臨床病例探索藥物檢測最為及時有效的方法。

　　“在實際檢測中有些定量方法的建立是非常困難的，通常需要花費一到兩個月的時間，有時也會走很多彎路。尤其是在研制他克莫司檢測試劑盒時，為了做到標準化，工作人員不斷摸索，對幾千個樣本的方法從不穩定到穩定，再到臨床驗證，進行了無數次檢測，從07年初到09年底經歷了近三年的時間，通過中心相關工作人員的不懈努力，最終獲得了SFDA批準文號。”此時，李老師臉上露出了幸福的微笑。 接著，李老師非常激動地說：“整個質譜檢測團隊的工作積極很高，熱情飽滿，在實際的工作中不斷探索，遇到的問題及時總結，積極應用新方法、新技術，注重與業內外交流與合作，實干與巧干緊密結合，使創新真正的在實際工作中發揮作用”。

　　創新的想法落到實處，還應包括他們結合規范要求和自身工作特點編制的SOP。李老師為我們展示了他們的實驗記錄本，所填項目非常詳細，包括檢測室內溫度、濕度、是否出現異常狀況、校準維護、實驗具體的流程方法、碰到的各種問題等等，一本一本并排整齊地羅列在辦公桌上。這才是一個團隊致勝的法寶和利器。

 

　　心態開放 愿意合作交流

　　每月一次，至今已舉辦了25期的質譜沙龍，本身就是業界的一個奇跡。而李老師本人在沙龍上做的報告至少在10個以上，凡是他們的實驗有了什么成果，或遇到了什么瓶頸，他總會把自己的想法和摸索的經驗拿出來跟大家探討。

　　這種開放的心態不僅讓他們從交流、探討、互相學習中開闊研究思路，更快地找到解決問題的方法;而且為他們帶來了很多意想不到的收獲：

　　他們和本醫院的各一線科室都建立了雙贏的關系，他們為臨床提供檢測服務，臨床為他們的科研實踐提供了最好的平臺。

　　他們加入了北京師范大學的質譜中心，劉麗宏主任被聘為北師大的客座教授，他們和生命學院、環境學院都開展了尖端學術課題的研究。

　　通過沙龍，他們還結識了眾多外單位，不斷地嘗試和外單位的合作。

　　儀器公司也愿意把國外最新的方法介紹給他們嘗試，因為公司知道跟這里合作，有極大的可能性快速獲得成功。

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　　探索儀器與人，儀器共享的新思路

　　一個試驗人員眼中的儀器共享

　　近來，大型儀器的共享問題不斷被提出，國家、各部委、各院校、各地區都相繼出臺了各種方案，比如，讓儀器共享和儀器補貼掛鉤，讓儀器共享和經費投入掛鉤等等。但也有一些科研檢測人員有不同的看法：儀器如果做檢測，成就的是別人，不劃算，檢測最終是為他人做嫁衣。

　　我們看到的質譜檢測中心的景象是，春節前第三天，兩臺質譜還在24小時不停地運轉，中心的儀器平均使用率可達到80~90%，部分儀器達到了飽和狀態。筆者禁不住就問到了這個問題：作為一線人員，你們是不是只愿做科研，不愿意做外來的檢測樣?

　　李老師的答案卻讓人吃驚：“有些分析測試人員只關心科研項目，對送檢樣品漠不關心，這種現象比較普遍，但也可以理解。而我們非常愿意接受對外檢測，這是有好處的，一方面通過不斷地接觸新樣品提高了自身檢測水平;另一方面，雖然第一次送樣的客戶有可能只是做一個檢測項目，但初次接觸后，有些客戶可能長期合作，我們今后可能挖掘出更大的課題項目，這樣的事例常常發生。” 李老師說，“比如，有些企業打電話過來，我們在完成科研并且儀器狀態允許的前提下，會和他們協商擠出時間做檢測，哪怕是加班加點。”

　　這是筆者第一次聽到這種說法，如果每個一線的技術人員都能這么想問題，也許儀器共享根本就不是問題了吧!

 

　　分析測試人員應看到自身潛力并不斷去實現自身價值

　　當談到如何評價分析測試人員自身價值時，李老師講到在做大課題的時候，往往認為分析測試平臺僅僅只是其中的輔助手段，地位比較靠后。但實際上，在從設計實驗→樣品制備→檢測服務→總結報告整個檢測流程中，分析人員會不斷和客戶進行溝通交流，這樣長久以來，就會慢慢達成合作的關系，能夠共同完成整個課題的研究，這時分析測試人員就不再只是簡單的第三方檢測的身份了。

　　整個檢測過程中，往往都是在應用中發現問題，之后再重新做基礎工作，從最初的機理研究中找到解決問題的方法，從而再去指導應用，所以分析檢測人員要始終具備創新的理念，不斷地從新的檢測方法和角度去思考。當儀器廠商推出新產品時，要結合自身的檢測需求，在原有產品的基礎上不斷地衍生出新技術，開發出創新的檢測方法。

　　李老師最后指出，目前，二炮總醫院質譜檢測中心仍在不斷地開展小分子領域的研究，爭取在氨基酸、有機酸、維生素、激素這四大方向上做得更加深入，使得自身有更多的機會主導課題研究。

 

　　【小編寄語】在二炮質譜檢測中心的走廊上，我們看到了他們認真學習科學發展觀的海報，以及張貼的多篇《建國大業》的觀后感，不知是否也是增強他們團隊凝聚力的一種方式?讓我們在新的一年里祝福這個年輕的團隊吧，祝福他們攻克更多的難關，做出更多創新的工作。