食品中罌粟殼成分檢測方法的研究

　　摘 要：本文簡單介紹了罌粟殼生物堿成分及危害以及食品中添加罌粟殼成分的近況，評述了食物中嬰粟殼成分的大部分檢驗方法，展示了近幾年來我國在食品檢測方面的研究現狀與進展。 
　　引言 
　　嬰粟殼是嬰粟果實晾干所成的。因為罌粟殼具有止咳鎮痛等藥用價值，在中藥配方中也經常用得到。但部分不法商家為了謀取自身的利益，在各種食物以及調味料中加入罌粟殼。我國法律禁止在食品或調味品中添加含有罌粟殼成分的物質。我國急需創立快速檢測食品中罌粟殼等成分含量的方法。 
　　1 罌粟殼生物堿成分及危害 
　　罌粟殼（Pericarpium Papaveris），又名“御米殼”，俗稱“米殼”。為植物罌粟（Papaver somniferum L.）的干燥成熟果殼。含有20多種生物堿，其中以嗎啡（Morphine，5.6%～12.83%）、可待因（Codeine，0.63%～2.13%）、那可丁（Narcotine）、罌粟堿（Pa-pavarine）等為主要成分。 
　　對吸毒成癮的人來說，食用含有罌粟殼成分的食品并沒有什么作用，但是對沒有接觸過毒品的人來說，危害卻是十分大的。這些人吃了含有罌粟殼成分的食品之后，多多少少都會產生輕快的感覺，表現在身體且各有不同，一些人可能面部略微發紅，一些人可能會心跳加速，一些人可能容易打盹，而一些人可能容易失眠。人們長期食用這種食品，可能會表現出發冷、乏力、出虛汗、面黃肌瘦等癥狀；嚴重時，可能會損害到人自身的生理系統，出現內分泌失調等癥狀，導致上癮，給社會造成了十分不好的影響。 
　　2 食品中摻入罌粟殼的近況 
　　2016年1月20日，國家食藥監總局在官網發布通告稱，發現我國35家餐飲服務單位存在涉嫌違法添加行為，其經營的食品中含有罌粟殼中罌粟堿、嗎啡、可待因、那可丁、蒂巴因等成分。 
　　3 食品中罌粟殼成分的檢測方法 
　　3.1 分光光度法（UV-Vis） 
　　嗎啡酚羥基在酸性水溶液中與NaNO？生成亞硝基嗎啡，在氨堿性條件下顯黃棕色，同時在420nm處用2cm比色池進行比色，在嗎啡濃度0―10mg/100mL范圍內吸光度與濃度之間存在線性關系。該法檢出限嗎啡0.1mg/100mL，罌粟殼1g/100mL。線性范圍：嗎啡0.1-10 mg/100mL，罌粟殼1-5 g/100mL。該法過程繁瑣復雜，且嗎啡含量受多因素影響，只能定性和半定量測定。 
　　3.2 薄層色譜法（TLC） 
　　精密稱取取罌粟籽和殼粉末樣品各10g，分別放于索氏提取器中并加入95%的乙醇200ml，放在水浴鍋中回流提取8h，蒸除溶劑（使液休總體積在5ml以下），放冷后轉移至10ml容量瓶中，加入95%的乙醇至刻度線處，搖勻。取4μl點樣于硅膠板上，展開之后掃描測定。將樣品和加入已知量生物堿的樣品分別提取，點樣，展開及掃描測定，用差減法求出加入各生物堿的回收率。由結果看出，該方法具有較高的回收率。比較每種生物堿的三次測定結果還可以看出，該方法具良好的重現性。 
　　3.3 紙層色譜測定法 
　　取17x18cm新華濾紙一塊，在距底端2.5cm處劃一線，在線上用微量注射器點樣5μl，在樣斑兩側分別點加空白樣品氯仿提取物及0.05、0.1、0.3μg嬰粟堿對照樣，所點樣斑直徑<3mm，將濾紙卷成筒狀，用釘書機將紙筒固定。在層析缸中加入展劑（2%檸檬酸氫鈉：丁醇10：0.5），加蓋后稍加搖動，靜置10min，將濾紙筒放入，待展劑上升10cm時取出層析紙，揮去展劑，在254nm熒光燈下觀察，嬰粟堿呈綠色熒斑，Rf0.71。氣相色譜法的靈敏度高于紙層色譜法，其正反應檢出率（30.0%）亦高于紙層色譜法。由于氣相色譜儀目前尚未普及，紙層色譜法在基層仍不失為簡便易行檢查嬰粟殼的篩選方法。 
　　3.4 高效液相色譜法（HPLC） 
　　高效液相色譜法的樣品提取和薄層色譜法相同，用HA～0.45μm濾膜過濾。推薦的色譜條件為：色譜柱HPODSHypersil（Φ5μm，200×4.6mm），流動相：乙腈：磷酸鹽緩沖液（45：55），流速為1.0ml/min，紫外檢測器（230nm），檢測靈敏度為0.004AUFS，最低檢出量1.1ng。 
　　3.5 實時熒光PCR 
　　選取常見的用于配制復合調味粉的調味料，包括花椒、辣椒、甘菘、沙仁、香葉、小茴香、桂皮、草果、豆蔻、八角、孜然、迷迭香，常規PCR擴增檢測引物特異性。將罌粟殼基因組DNA調整濃度為100ng/μl，梯度稀釋成10ng/μl，1ng/μl，100pg/L，10pg/L，1pg/L共5個濃度梯度，進行靈敏度試驗。將罌粟殼樣品研磨成粉碎狀處理后，根據重量比的不同分別添加到不含罌粟殼成分的五香粉基質中，制備成100%，10%，1%，0.1%，0.01%共5個梯度含量的樣品，進行檢出限試驗。 
　　3.6 氣相色譜質譜聯用法（GC- MS） 
　　用氣相色譜質譜聯用中SIM模式進行離子提取，將罌粟殼加入正常的火鍋湯底作為陽性樣品，模擬罌粟殼加入各種湯底組成中的方法，萃取液用三種組合的有機溶劑分別充當，定性檢測湯料中的可待因、嗎啡、蒂巴因、罌粟堿、那可汀等生物堿。結果：在罌粟殼加入量同等時，罌粟殼生物堿響應值最高的是無油稀湯底，最容易被檢測出；罌粟生物堿提取效果最好的是用氯仿+乙醇（9+1）作萃取液；用可待因作為檢出指標，檢測靈敏度最高。 
　　3.7 液相色譜質譜聯用法（LC- MS） 
　　樣品經過QuEChERS方法提取、凈化后，采用超高效液相色譜串聯三重四極桿質譜儀（UPLC-MS），在多反應監測（MRM）模式下，通過色譜、質譜條件優化及方法學考察，建立了高效、準確檢測火鍋調料中非法添加罌粟殼等相關成分的方法。結果本方法的線性范圍為：那可丁2.470～49.405ng/ml，r=0.9994；罌粟堿2.090～41.804ng/ml，r=0.9995；蒂巴因2.042～40.840ng/ml，r=1.000；可待因11.287～225.733 ng/ml，r=0.9996；嗎啡10.420～208.400ng/ml，r=0.9999。回收率78.4%～100.6%。 
　　4 結語 
　　本文綜述了食品內含嬰粟殼成分的大部分檢驗方法，展示了近幾年來國內食品檢驗的研究現狀與進展。目前國內檢測食品中罌粟殼含量的檢測技術大致分為四大類：紙質色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、示波極譜法。各有各的優缺點，薄層層析法適合快速檢驗，高效液相色譜法適合準確的定量分析，都值得今后更多的推廣和應用。 
　　參考文獻 
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　　作者簡介： 
　　魏雅涵（1997.07― ）女，浙江杭州，本科，中國計量學院現代科技學院學生，研究方向：生物工程。