實驗概要
本實驗介紹了骨髓染色體培養同步化操作方法。
實驗步驟
1. 培養制備
1) 在室溫或37±2℃的溫度下解凍骨髓細胞染色體同步化套裝培養管或培養瓶。
2) 在無菌條件下添加1ml骨髓(加入的量由樣本細胞密度決定)至一個試管中或分配5ml瓶裝的介質到一個細胞培養瓶中并加入樣本。
3) 蓋上培養管的蓋子。
4) 混合培養管(或培養瓶)中的物質，水平放置(在它的平坦的表面上)，并在37±2℃的溫度下溫育。沒有必要添加CO2, 因為該介質的構成就是為關閉系統中最佳的淋巴細胞擴散而設計的。
2. 培養同步化
1) 經過48-72小時的培養后，添加0.1ml的溶液A并溫育一整夜。
2) 溫育后，添加0.1ml的溶液B并溫育5小時(沒有必要清洗細胞)。
3) 添加20ul秋水仙素(10ug/ml)，并在37±2℃的溫度下溫育60分鐘(大約)。如果要獲得更多數量的前中期分裂相，可將溫育時間減少至15分鐘。
3. 染色體固定和玻片制備
1) 溫育后，如有必要，將培養轉移至一個試管，并用離心機分離3-4分鐘，轉速為每分鐘2.000(更快的轉速不會損壞細胞)。
2) 倒掉上層清液，注意不要使細胞粒子松散(推薦留大約0.5ml的物質在試管內)。
3) 有力地重新懸掛粒子。
4) 添加5ml低滲液(滴入H2O、0.56%氯化鉀)，并充分混合。
5) 在室溫下至少溫育7分鐘。
6) 用離心機分離3-4分鐘，轉速為每分鐘2.000。
7) 根據步驟2倒掉上層清液。
8) 有力地重新懸掛粒子。
9) 添加5ml Ibraimov溶液(滴入H2O、5%醋酸)，并充分混合。
10) 立即用離心機分離3-4分鐘，轉速為每分鐘2.000。
11) 根據步驟2)倒掉上層清液。
12) 有力地重新懸掛粒子。
13) 添加5ml固定液(甲醇：醋酸，3:1)，并充分混合。
14) 重復步驟10-13。
15) 立即用離心機分離3-4分鐘，轉速為每分鐘2000。
16) 仔細倒掉幾乎全部的上層清液。
17) 添加幾滴新準備的固定劑，要考慮到滴數應當適合粒子內的細胞濃度。
18) 滴一小滴細胞懸浮液到一塊干凈且濕潤的顯微鏡玻片上。
19) 放進Optichrome染色體分散儀內，在正確溫度和相對濕度的恒定條件下蒸發。