多波長分析更準確的測定細胞響應 除了熒光圖像外,ImageXpress Micro系統還可以捕捉到透射光圖像(transmitted light, TL)從而更準確的鑒別細胞。在這個基于細胞的檢測例子中,系統同時捕捉了透射光和熒光圖像,并用MetaXpress 軟件的用戶自定義模塊對細胞進行分析。 對同一個孔的熒光圖像觀察顯示抗體已經結合到了細胞表面,但是如果將熒光和透射光圖像疊加就可以看到并非每個細胞都和抗體結合在一起(圖3,左上)。隨后的圖像分析正確的篩選出了與抗體結合的陽性細胞(圖3,右上)。另一個孔的Cy5通道圖像顯示出高熒光信號,意味著抗體的有效結合。然而,通過透射光和熒光的疊加分析可以看出此孔中的細胞并未與熒光有效結合(圖3,左下)。圖像分析確定了這些高熒光信號是由人為因素而非細胞本身引起的,所以這些細胞被標記為未連接到抗體(圖3,右下)。
上:Cy5(紅色)和透射光(半透明)圖像疊加后顯示出所有抗體結合的陽性和陰性細胞(左)。分析圖中將抗體結合的陰性細胞顯示為黃色,陽性細胞(Cy5通道)顯示為藍色,重疊的部分為白色(右)。 下:Cy5(紅色)和透射光(半透明)圖像疊加后顯示出沒有與細胞重疊的雜質熒光(左)。分析圖中將抗體結合的陰性細胞顯示為黃色, Cy5通道陽性但與細胞無關的雜質顯示為粉色(右)。 檢測實驗可以很容易的通過優化二抗濃度來確定條件。在這個例子中,我們用三種不同濃度的二抗來結合寬濃度范圍的一抗。就如之前的磁珠檢測結果一樣,實驗顯示出了很好的“鉤狀現象(hook effect)”(圖4,上)。當二抗濃度為0.25μg/mL時的最低檢測閾值為0.5ng/ml,這一數值與標準的FMAT方法一樣。三種濃度的二抗在滴定范圍內都顯示出了良好的線性(圖4,下)。
上:三種不同濃度二抗的一抗滴定實驗(顯示于X軸)。 下:結果表明,分析物(一抗)在五倍稀釋梯度下呈線性關系,其LLD為0.5ng/mL 基于圖像的單抗檢測分析更具靈活性 與傳統的FMAT檢測方法相比,應用ImageXpress Micro系統和 MetaXpress軟件的單抗結合高內涵成像分析方法可以提供更多的信息。本系統可以在消除通常人為誤差的基礎上更快速的得到準確的細胞響應,從而得到更精確的結果。另外,科學家們可以檢測配體與細胞表面的結合并進一步在任意波長檢測二抗標簽,在一個平板上檢測不同細胞以及在不影響靈敏度的情況下將檢測擴展到1536孔板。