癥狀
(一)保留時間變化
可能的原因:解決方法
1.柱溫變化:柱恒溫
2.等度與梯度間未能充分平衡:至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
3.緩沖液容量不夠:用>25mmol/L的緩沖液
4.柱污染:每天沖洗柱
5.柱內條件變化:穩定進樣條件,調節流動相
6.柱快達到壽命:采用保護柱
(二)保留時間縮短
可能的原因:解決方法
1.流速增加:檢查泵,重新設定流速
2.樣品超載:降低樣品量
3.鍵合相流失:流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向
4.流動相組成變化:防止流動相蒸發或沉淀
5.溫度增加:柱恒溫
(三)保留時間延長
可能的原因:解決方法
1.流速下降:管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡
2.硅膠柱上活性點變化:用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失:同前(二)3
4.流動相組成變化:同前(二)4
5.溫度降低:同前(二)5
(四)出現肩峰或分叉
可能的原因:解決方法
1.樣品體積過大:用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%
2.樣品溶劑過強:采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內燒結不銹鋼失效:更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
5.進樣器損壞:更換進樣器轉子
(五)鬼峰
可能的原因:解決方法
1.進樣閥殘余峰:每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物:處理樣品
3.柱未平衡:重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑(尤其是離子對色譜)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜):每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相):通過變化平衡時間檢查水質量，用HPLC級的水
(六)基線噪聲
可能的原因:解決方法
1.氣泡(尖銳峰):流動相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機噪聲):清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑
3.檢測器燈連續噪聲:更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲):采用穩壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)
5.檢測器中有氣泡:流動相脫氣,加柱后背壓
(七)峰拖尾
可能的原因:解決方法
1.柱超載:降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾:清潔樣品,調整流動相
3.硅羥基作用加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品
4.同前(四)4:同前(四)4
5.同前(四)35.:同前(四)3
6.死體積或柱外體積過大:連接點降至最低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管
7.柱效下降:用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱
(八)峰展寬
可能的原因:解決方法
1.進樣體積過大:同(四)1
2.在進樣閥中造成峰擴展:進樣前后排出氣泡以降低擴散
3.數據系統采樣速率太慢:設定速率應是每峰大于10點
4.檢測器時間常數過大:設定時間常數為感興趣第一峰半寬的10%
5.流動相粘度過高:增加柱溫,采用低粘度流動相
6.檢測池體積過大:用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時間過長:等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過大:將連接管徑和連接管長度降至最小
9.樣品過載:進小濃度小體積樣品