(1) 首先將內層鍋取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。
(2) 放回內層鍋，并裝入待滅菌物品 （培養基等）。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸氣流通而影響滅菌效果，三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透人棉塞。
(3) 加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層鍋的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺拴，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。
(4) 用電護或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸氣壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所得壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。
(5) 滅菌所需時間到后，切斷電源或關閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至“0”時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。