高壓蒸汽滅菌器滅菌時間的控制不是一定的，滅菌溫度越低,需要的滅菌時間越長；滅菌溫度越高,需要的滅菌時間越短；壓力蒸汽滅菌的時間，要從滅菌器柜室內達到滅菌要求溫度時算起，直至滅菌完成為止。
高壓蒸汽滅菌器滅菌時間包括：
①穿透時間，從鍋內達到滅菌溫度開始計算時間，到鍋內Z難達到的部位也達到此溫度的時間;
②維持時間，即殺滅微生物所需時間，一般以殺滅嗜熱脂肪桿菌芽胞所需時間來表示;
③安全時間，為使滅菌得到確切保證所需增加的時間。一般為熱死亡時間的一半，其長短視消毒物品而定。對易導熱的金屬器材的滅菌，不需要安全時間。在滅菌時間內，要注意壓力表，及時間調節進氣量，以保持在的壓力，維持到滅菌時間為止。在滅菌過程中，如有壓力、溫度下降，應重新升溫升壓，重新計時。
1)一般下排氣式高壓滅菌器所需時間為：115℃需要30分鐘、121℃需要15分鐘、126℃需要10分鐘
2)115℃常用于制藥工業上的滅菌。在微生物實驗室內，有些含糖培養基亦用115℃30分鐘滅菌，因為在更高溫度下糖會分解。
3)121℃～126℃常用于醫療衛生和防疫工作中的滅菌。
以上所述知識滅菌時間的概數，1次滅菌中具體使用多少時間，需要根據物品的種類、包裝的大小、安放情況和滅菌器的性能來確定。
滅菌后。
要求消毒物品干燥后，檢查指示劑達到滅菌要求即可出鍋。取無菌物品時，要嚴格無菌操作，開蓋物品先將蓋蓋好，貯槽關閉好通氣孔。同時應分類放置，順序發放取用。超過有效期，炎熱潮濕季節一般不超過七天。