高爾基體的鑒定實驗

高爾基體

Chamber 緩沖液

1. 從 1.2 mol/L 蔗糖/勻漿液界面處分離富含高爾基體的部分至終體積為 5 ml 左右 。

2. 分別加入 3 mg 的粗制曲霉 X-A型 α-淀粉酶和來自大麥芽的 3-A型 α-淀粉酶。

3. 將混合物在 4℃ 保溫 45 分鐘。

4. 保溫結束后用尖端內徑約 1 mm 的巴斯德吸管將懸液反復吹吸 40 次完成解除堆積的過程 。

5. 準備電泳介質（Chamber 緩沖液）

Chamber 緩沖液：

10 mmol/L 二乙醇胺

10 mmol/L 冰酸酸

5 mmol/L 葡萄糖

0.25 mmol/L 蔗糖

0.5 mmoI/L MgCl₂

6. 電泳中采用如下條件（除非廠家另有推薦）：167 mA ( 恒流），131±10% V/cm，緩沖液流速為 2.75 ml 每分部每小時，樣品注入速度為 3.5 ml/小時，溫度為 6℃，采用連續自由流動電泳裝置（如 VAP 21，Weber GmbH, Munich, Germany )。

7. 離心收集得到的分部，例如在微量離心機中離心 2 分鐘，然后重懸并用于分析。