用制備性的自由流動電泳對高爾基體進行亞分部
| 實驗材料 | 高爾基體 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | Chamber 緩沖液 |
| 實驗步驟 | 1. 從 1.2 mol/L 蔗糖/勻漿液界面處分離富含高爾基體的部分至終體積為 5 ml 左右 。 2. 分別加入 3 mg 的粗制曲霉 X-A型 α-淀粉酶和來自大麥芽的 3-A型 α-淀粉酶。 3. 將混合物在 4℃ 保溫 45 分鐘。 4. 保溫結束后用尖端內徑約 1 mm 的巴斯德吸管將懸液反復吹吸 40 次完成解除堆積的過程 。 5. 準備電泳介質（Chamber 緩沖液） Chamber 緩沖液： 10 mmol/L 二乙醇胺 10 mmol/L 冰酸酸 5 mmol/L 葡萄糖 0.25 mmol/L 蔗糖 0.5 mmoI/L MgCl2 6. 電泳中采用如下條件（除非廠家另有推薦）：167 mA ( 恒流），131±10% V/cm，緩沖液流速為 2.75 ml 每分部每小時，樣品注入速度為 3.5 ml/小時，溫度為 6℃，采用連續自由流動電泳裝置（如 VAP 21，Weber GmbH, Munich, Germany )。 7. 離心收集得到的分部，例如在微量離心機中離心 2 分鐘，然后重懸并用于分析。 |
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