高效液相色譜分析法的原理

它是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱內，在柱內各成分被分離后，依次進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，簡稱HPLC）又叫做高壓或高速液相色譜、高分離度液相色譜或近代柱色譜,以液體為流動相，采用高壓輸液系統，是色譜法的一個重要分支。

【簡介】

它是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱內，在柱內各成分被分離后，依次進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。這種方法已成為化學、生化、醫學、工業、農業、環保、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術，是分析化學、生物化學和環境化學工作者手中必不可少的工具。

【主要類型】

1．吸附色譜(Absorption Chromatography)
2．分配色譜(Partition Chromatography)
3．離子色譜(Ion Chromatography)
4．體積排阻色譜(Size Exclusion Chromatography)
5．親和色譜(Affinity Chromatography)

【特點】

高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點：

〈1〉高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

〈2〉高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

〈3〉高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。

〈4〉應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

〈5〉分析速度快、載液流速快：較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30 min，有些樣品甚至在5 min內即可完成，一般小于1h。

此外HPLC還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。HPLC的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。HPLC檢測器的靈敏度不及氣相色譜。