高效液相色譜的應用

例一、磺胺分析

樣  品：磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基異噁唑和甲氧芐氨嘧啶的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，740色譜數據處理機

檢測器：UV 481型紫外檢測器，波長240nm

色譜柱：μ-Bondapak C₁₈ , 5μm，柱長25 cm，柱徑4.6 mm

流動相：由KH₂PO₄（0.05mol/L）和Na₂HPO₄（0.05 mol/L）以及MeOH所組成，其用量比例為200:10:165，

流  速：1mL/min

進  樣：10μL

結  果：所有組分在6min之內全部流出，各組分完全分離，組分出峰順序為：磺胺保留時間為2.60 min, 磺胺嘧啶保留時間為3.18 min、磺胺甲基異噁唑保留時間為4.33 min,甲氧芐氨嘧啶保留時間為5.19min。

例二、銀杏內酯分析

樣  品：含銀杏苦內酯等4種物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀

        配有570自動進樣器，Rheadyane 77251進樣閥，HP化學工作站

檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發光散射檢測器

漂移管溫度為91℃，氮氣流速為2.75L/min

色譜柱：Platinum OPS，5μm，柱長625px，柱徑4.6mm

流動相：水:甲醇:四氫呋喃 = 75:20:10

流  速：1mL/min

進  樣：10μL

結  果：所有組分在15min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為銀杏苦內酯C, 峰2為白果內酯, 峰3銀杏苦內酯A, 峰4為銀杏苦內酯B。

例三、脂肪酸甲酯分析

樣  品：含5種脂肪酸甲酯的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發光散射檢測器

漂移管溫度為45℃，氮氣流速為1.5L/min

色譜柱：Silver Impregnated Ion-Exchange ,柱長625px，柱徑4.6mm

流動相：乙腈:甲醇 = 2:98

流  速：0.75mL/min

進  樣：10μL

結  果：所有組分在10min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為C_18：0脂肪酸甲酯，峰為C_18：1脂肪酸甲酯，峰3為C_18：2脂肪酸甲酯，峰4為C_18：3脂肪酸甲酯，峰1為C_20：4脂肪酸甲酯。

例四、嘌呤分析

樣  品：取1mL血漿加入200μL的1.98mol/L的高氯酸（GR），再加入600μL蒸餾水和200μL的1.47mol/L的別嘌呤醇（內標），用旋轉混合器振搖10s于1200g離心10min，取上層清液備分析用。

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：UV紫外檢測器，254nm

色譜柱：μBondapsk C₁₈ ，10μm，柱長750px，柱徑3.9mm

流動相：0.02mol/L的磷酸二氫鉀，pH = 2.2

流  速：2.0mL/min

進  樣：10μL

結  果：所有組分在12min之內全部流出，各組分分離完全，保留時間依次為：尿嘌呤為3.18min（峰1），腺嘌呤為3.21 min（峰2），次黃嘌呤為3.90 min（峰3），5-羥基吡嗪酸為4.75min（峰4），5-羥基吡嗪胺為5.31 min（峰5），黃嘌呤為5.90 min（峰6），吡嗪酸為7.35min（峰7），內標別嘌呤醇為8.53min（峰8），吡嗪胺為9.57min（峰9）。

例五、抗菌素分析

樣  品：含有紅霉素等5種抗菌素的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀

        配有570自動進樣器，Rheadyane 77251進樣閥，HP化學工作站

檢測器：2000型ELSD Alltech 蒸發光散射檢測器

漂移管溫度為95℃，氮氣流速為2.0L/min

色譜柱：Alltima^TM C₁₈ ,5μm，柱長375px，柱徑4.6mm

流動相：A為0.2% 五氟丙酸, B為甲醇

梯  度：時間      0min        5min   

        A/B     55%/45%     35%/65%        

流  速：1mL/ min

進  樣：10μL

結  果：所有組分在6min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為紅霉素，峰2為鏈霉素，峰3為托布霉素，峰4為阿米卡星，峰5為新霉素。

例六、無活菌素分析

樣  品：含無活菌素等5種物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀

        配有570自動進樣器，Rheadyane 77251進樣閥，HP化學工作站

檢測器：2000型ELSD Alltech 蒸發光散射檢測器

漂移管溫度為96℃，氮氣流速為2.9L/min

色譜柱：Alltima^TM C₁₈ ,5μm，柱長625px，柱徑4.6mm

流動相：THF:水 = 60:40

流  速：1mL/min

進  樣：20μL

結  果：所有組分在20min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為無活菌素，峰2為單活菌素，峰3為二活菌素，峰4為三活菌素，峰5為四活菌素。

例七、植物甾醇分析

樣  品：含β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇和膽固醇的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：Alltech 2000型  ELSD蒸發光散射檢測器

        漂移管溫度為70℃，氮氣流速1.6L/min

色譜柱：Supecol Discouery C₁₈ , 5μm，柱長625px ，柱徑4.6mm

流動相：甲醇

流  速：1mL/min

進  樣：10μL

結  果：所有組分在19min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為菜籽甾醇保留時間13.70min，峰2為膽固醇保留時間14.62 min，峰3為豆甾醇保留時間15.45min，峰4為菜油甾醇保留時間15.97min，峰5為β-谷甾醇保留時間17.05min。