高效液相色譜法的分類及其分離原理

高效液相色譜法分為：液-固色譜法、液-液色譜法、離子交換色譜法、凝膠色譜法。

1.液-固色譜法（液-固吸附色譜法）

固定相是固體吸附劑，它是根據物質在固定相上的吸附作用不同來進行分配的。

①液-固色譜法的作用機制

吸附劑：一些多孔的固體顆粒物質，其表面常存在分散的吸附中心點。
　　流動相中的溶質分子X（液相）被流動相S帶入色譜柱后，在隨載液流動的過程中，發生如下交換反應：
　　X（液相）+nS（吸附）<==>X（吸附）+nS（液相）
　　其作用機制是溶質分子X（液相）和溶劑分子S（液相）對吸附劑活性表面的競爭吸附。
　　吸附反應的平衡常數K為：
　　K值較小：溶劑分子吸附力很強，被吸附的溶質分子很少，先流出色譜柱。
　　K值較大：表示該組分分子的吸附能力較強，后流出色譜柱。
　　發生在吸附劑表面上的吸附-解吸平衡，就是液-固色譜分離的基礎。

②液-固色譜法的吸附劑和流動相

常用的液-固色譜吸附劑：薄膜型硅膠、全多孔型硅膠、薄膜型氧化鋁、全多孔型氧化鋁、分子篩、聚酰胺等。

一般規律：對于固定相而言，非極性分子與極性吸附劑（如硅膠、氧化銅）之間的作用力很弱，分配比k較小，保留時間較短；但極性分子與極性吸附劑之間的作用力很強，分配比k大，保留時間長。

對流動相的基本要求：
　　試樣要能夠溶于流動相中
　　流動相粘度較小
　　流動相不能影響試樣的檢測

常用的流動相：甲醇、乙醚、苯、乙腈、乙酸乙酯、吡啶等。

③液-固色譜法的應用

常用于分離極性不同的化合物、含有不同類型或不；數量官能團的有機化合物，以及有機化合物的不同的異構體；但液-固色譜法不宜用于分離同系物，因為液-固色譜對不同相對分子質量的同系物選擇性不高。

2.液-液色譜法（液-液分配色譜法）

將液體固定液涂漬在擔體上作為固定相。

①液-液色譜法的作用機制

溶質在兩相間進行分配時，在固定液中溶解度較小的組分較難進入固定液，在色譜柱中向前遷移速度較快；在固定液中溶解度較大的組分容易進入固定液，在色譜柱中向前遷移速度較慢，從而達到分離的目的。

液-液色譜法與液-液萃取法的基本原理相同，均服從分配定律：K=C固/C液

K值大的組分，保留時間長，后流出色譜柱。