高效液相色譜法(HPLC)是一種常用的分離和分析方法,常用于有機物、生物大分子、離子、蛋白質、糖類等物質的分離和測定。在HPLC分析中,常用的定量分析方法有外標法、內標法和歸一法。
外標法:此方法是通過比較樣液與標準溶液中目標物質的峰面積來確定樣液中目標物質的含量。
內標法:此方法是在樣液中加入一種內標物,通過比較樣液與標準溶液中目標物質和內標物的峰面積來確定樣液中目標物質的含量。具體操作是將標準溶液和內標物分別注入色譜柱和檢測器中,記錄峰面積,繪制標準曲線。然后將樣液和內標物注入色譜柱和檢測器中,記錄峰面積,并根據標準曲線計算樣液中目標物質的含量。此方法的優點是能夠抵消儀器波動和環境變化對測量結果的影響。
歸一法:此方法是通過比較樣液與標準溶液中各組分的峰面積來確定樣液中各組分的含量。具體操作是將標準溶液分別注入色譜柱和檢測器中,記錄各組分的峰面積,繪制標準曲線。然后將樣液注入色譜柱和檢測器中,記錄各組分的峰面積,并根據標準曲線計算樣液中各組分的含量。此方法的優點是簡便、快速,適用于多組分分析,但準確性較低。