人參，別名為山參、園參，為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根，其葉也入藥，稱為參葉。我國是世界上人參生產大國，其產量占全世界的60%，種植地主要分布于我國東北各省，遼寧、吉林有大量栽培，近年河北、山西、陜西、甘肅、寧夏、湖北等省區也有種植[1]。作為我國特產的珍貴藥材之一，人參具有調節中樞神經系統、改善心臟功能、降血糖作用、增強機體的免疫功能、抗腫瘤、抗氧化等作用，因而自古以來就被作為名貴的補品。
人參以其特殊的醫療保健功能，得到充分的開發利用，如今人參加工產品種類越來越多，如人參保健品、人參藥酒等，但是大量廢棄的根渣中仍含有豐富的活性成分。人參多糖 (ginseng polysaccharide,GPS) 作為人參的主要活性成分之一，具有提高肌體免疫力、抗腫瘤、降血糖以及調控血細胞生成的作用[2]。國內測定多糖含量常用硫酸草焱和硫酸脖椒臃止夤舛確ǎ 但誤差較大，現有的比色重現性差，受影響因素多，尤其蒽酮試液加熱后對最大吸收峰影響較大。高效液相色譜法是在經典的液相色譜基礎上發展起來的一種高效、高速、高靈敏度的分析方法，目前其應用已超過氣相色譜法[3]。本文采用高效液相色譜法對人參渣中的人參多糖進行定量分析，為綜合開發利用人參的新途徑提供科學參考依據。
1 儀器與試劑
Agilent technologies1200型高效液相色譜儀(美國Agilent公司);光電二極管陣列檢測器;N2000 色譜數據工作站;UV2500型紫外可見分光光度計(日本島津公司);TGL16G高速冷凍離心機(香港力康發展有限公司);KQ250B超聲波清洗機 (昆山市超聲儀器有限公司)。D參匏葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：1108332200302，供含量測定用);甲醇(HPLC級，美國 Tedia公司);人參渣為保健品公司產品加工后的人參渣廢棄物。
2 方法與結果
2.1 波長選擇
稱取D參匏葡萄糖對照品1.0mg，置于100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，用紫外分光光度計在200～400nm波長范圍內掃描，分析紫外吸收圖譜可見，葡萄糖在214nm處有最大吸收峰，因此選擇此處為檢測波長。
2.2 色譜條件
色譜柱Nova Pak C18 (150mm×3.9mmColumn，4μm，美國Waters公司);流動相為水布狀(1∶1)，用磷酸調節pH值至3.0;流速為1ml/min; 柱溫30℃;檢測波長為214nm;進樣量為20μl。在上述色譜條件下，D參匏葡萄糖的保留時間為6.687min。
2.3 對照品溶液的制備
精密稱取一定量的經80℃ 干燥至恒重的D參匏葡萄糖對照品，加流動相制成濃度為10mg/ml的對照儲備溶液。
2.4 供試品溶液的制備
將人參渣經60℃減壓干燥24小時后，粉碎、過篩，得到100目的人參渣粉。加適量純凈水常溫浸泡1小時，加熱至45℃，超聲波功率200W，超聲提取 30min，過濾后將濾液濃縮至原體積的1/3，向濃縮液中加乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，離心(3000r/min)15min，棄去上清液，取沉淀物于恒溫干燥箱中干燥后即得多糖粗品。將所得多糖粗品溶于適量流動相，于100℃條件下水浴90min，得到供試品溶液。
2.5 線性關系考察
取對照儲備液，依次稀釋成濃度為0.5、1、2、4、6、8、10mg/ml的溶液進行HPLC測定，以峰面積為縱坐標、溶液質量濃度為橫坐標繪制標準曲線，求得回歸方程為Y=95736X+ 482411，r2= 0.9995(n=7)，結果表明葡萄糖質量濃度在0.5～10mg/ml范圍內與峰面積線性關系良好。
2.6 精密度試驗
取對照儲備溶液，將其稀釋成濃度為0.2mg/ml的溶液，精密吸取20μl，連續進樣6次，測得葡萄糖峰面積的相對標準偏差(RSD值)為0.58%(n=6)，表明該法具有良好的精密度。
2.7 穩定性試驗
取供試品溶液，按進樣色譜條件分別于0、4、8、12、24小時測定葡萄糖峰面積，得到RSD值為0.96%，表明供試品溶液在24小時內穩定。
2.8 重復性試驗
精密稱取人參渣粉6份，每份約5g，按2.3項方法制備，置于100ml容量瓶中，加流動相至刻度，進樣20μl，用HPLC法測定每份樣品中人參多糖的含量。結果測得1mg人參渣中人參多糖(以D參匏葡萄糖計)的平均含量為0.3802mg。RSD=1.68 %，表明試驗重復性好。
2.9 加樣回收率試驗
精密稱取人參渣粉6份，每份約50g，按2.3項方法制備，置于100ml容量瓶中，加流動相至刻度，進樣20μl，用HPLC法測定。計算平均加樣回收率為100.43%，其RSD值為1.06%，見表1。表1 樣品加樣回收率試驗結果
3 討 論
制備供試品溶液的過程中，分別進行不同水解時間的考察，發現隨著時間延長，水解效果越好，但當水解達到90min后，峰面積無明顯變化，故選擇90min為本實驗的水解時間。
目前常用的多糖類化合物的提取技術主要有[4]：①熱水浸提法;②水提醇沉法;③堿提取法;④酸提取法;⑤超聲提取法;⑥酶提取法。其中，超聲提取技術適用于天然產物，特別是中草藥有效成分如多糖、黃酮等各種類型成分的提取，是中藥制藥徹底改變傳統提取工藝的新方法、新工藝[5]。與常規的提取方法相比，該法具有提取溫度低、適用性廣、能耗低等特點。另外，超聲波破碎過程是一個物理過程，提取過程中無化學反應，被提取的生物活性物質在短時間內保持不變，生物活性不減，同時，提高了細胞破碎速度，縮短了破碎時間，可極大地提高提取效率[6]。本研究比較了水提醇沉法和超聲提取法的多糖提取效率，發現超聲提取不僅多糖含量要高出12%，且節省大部分時間。
本研究建立了HPLC法測定人參渣中活性成分—人參多糖的含量，該法準確可靠、易操作、靈敏度高，測得人參渣中含有38%的人參多糖，說明人參渣仍具有進一步開發利用的價值。
【參考文獻】
[1] 宋小妹,唐志書.中藥化學成分提取分離與制備[M].北京:人民衛生出版社,2009.72.
[2] 趙俊,吳宏,王亞平.人參多糖的化學與藥理學研究進展[J].國外醫學，中醫中藥冊,2004,26(2):7981.
[3] 高文遠.現代中藥質量控制及技術[M].北京:科學出版社,2010.63.
[4] 張昌軍,原方圓,邵紅兵.超聲波法在提取多糖類化合物中的應用研究[J].化工時刊,2007,21(2):5456.
[5] 宋小妹,唐志書.中藥化學成分提取分離與制備[M].北京:人民衛生出版社,2009.8.
[6] 鄧修.中藥制藥工程與技術[M].上海:華東理工大學出版社,2008.127128.