高效液相色譜法測定決明子中的蒽醌

目的測定決明子中5種蒽醌類成分的含量。方法采用高效液相色譜法。色譜柱：Shim-pack CLC-ODS C18柱；流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫；流速：1 ml/min；λ：440 nm。結果該方法準確可靠，重現性好。結論 該方法可以測定決明子中5種蒽醌類成分的含量。

決明子為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明Cassia tora L.的干燥成熟種子。性味甘、苦、咸、微寒，歸肝、大腸經。具有清肝明目、潤腸通便之功效，為臨床常用中藥［1］。其主要化學成分為蒽醌類化合物。本實驗采用HPLC法同時測定了決明子中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量，為決明子中有效物質研究奠定了基礎。

1、儀器與材料     

LC-l0ATvp高效液相色譜儀(日本島津公司)，AEG-45SM電子天平(十萬分之一)，大黃素(批號0756200009)，大黃酚(批號110796200513)，大黃素甲醚(批號07589803)(均購自中國藥品生物制品檢定所)，決明子(重慶合川GAP種植基地，由重慶市中藥研究院生藥室提供并鑒定)，水為重蒸水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2、方法與結果      

2.1 對照品溶液的制備分別精密稱取蘆薈大黃素0.53 mg，大黃酸0.58 mg，大黃素0.55 mg，大黃酚0.53 mg，大黃素甲醚0.58 mg，加甲醇超聲溶解，分別定容至5 ml，作為對照品溶液。精密吸取上述5種對照品溶液各2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，即得混合對照品溶液，其濃度分別為蘆薈大黃素0.021 2 mg/ml，大黃酸0.023 2 mg/ml，大黃素0.022 mg/ml，大黃酚0.021 2 mg/ml，大黃素甲醚0.023 2 mg/ml。

2.2 供試品溶液的制備取決明子藥材粉末(過4號篩)約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加80%乙醇100 ml回流提取至無色，合并提取液，定容至100 ml，精密吸取25 ml提取液，經減壓回收后，殘渣加濃度為1 mol/L鹽酸溶液40 ml回流水解3 h，然后用120 ml氯仿分4次回流萃取，30 ml/次，合并氯仿萃取液并加適量蒸餾水洗至中性，回收氯仿。殘渣甲醇仿溶解并轉移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得［2，3］。

2.3 色譜條件色譜柱為Shim-pack CLC-ODS C18(6.0 mm ×150 mm，5 um)；流動相為甲醇－0.1%磷酸水溶液梯度洗脫；流速1 ml/min；柱溫25℃；檢測波長440 nm.      

2.4 標準曲線的繪制分別精密吸取混合對照品溶液8 ，10，12 ，14 ，16 μl進樣，測定基線構成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積 ，繪制標準曲線，計算混合對照品中各對照品的回歸方程及線性范圍，結果蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的回歸方程分別為：Y = 814521X -20 442，Y = 1 110 506X - 7 296，Y=1431 202X 4 274，Y =1 739 861X - 24 381，Y = 707 106X - 26 453，其線性范圍分別為：0.170～0.339，0.186～0.371，0.176～0.352，0.170～0.339，0.186～0.371 μg。

2.5 精密度實驗精密吸取混合對照品溶液10 μl，進樣，測定各峰峰面積，連續測定5次，求得各峰面積值的相對標準偏差(RSD)分別為：蘆薈大黃素0.7%，大黃酸1.8%，大黃素0.6%，大黃酚1.1%，大黃素甲醚1.4%。結果表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性實驗      

2.6.1 對照品溶液穩定性實驗精密吸取混合對照品溶液10 μl，進樣，分別于0，2，4，8，12，24 h后重復進樣 ，計算各成分峰面積值的相對標準偏差(RSD)分別為：蘆薈大黃素0.9%，大黃酸0.8%，大黃素0.7%，大黃酚1.2%，大黃素甲醚1.3%。結果表明混合對照品溶液在24 h 內基本上是穩定的。

2.6.2 供試品溶液穩定性實驗精密吸取供試品溶液10 μl，進樣，分別于0，2，4，8，12，24 h后重復上述操作 ，計算各成分峰面積值的相對標準偏差(RSD)分別為：蘆薈大黃素0.6%，大黃酸0.7%，大黃素1.3%，大黃酚0.6%，大黃素甲醚1.7%。結果表明供試品溶液在24 h內基本上是穩定的。

2.7 重現性實驗 精密稱取決明子藥材5份，照“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備供試液，精密吸取供試品溶液10 μl，進樣，測定各成分峰面積值，計算各成分平均含量及RSD值分別為：蘆薈大黃素為0.0084%，RSD為0.8%；大黃酸為0.0079%，RSD為1.1%；大黃素為0.0313％，RSD為1.2%；大黃酚為0.1732%，RSD為0.7%；大黃素甲醚為0.0883%，RSD為1.3%。結果表明，該方法具有較好的重現性。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱取決明子藥材6份，每份約0.5 g，精密稱定，分別精密加入大黃酚對照品(50 μg/ml)15 ml。照“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備供試液，精密吸取供試品溶液10 μl，進樣，測定大黃酚的峰面積。

2.9 樣品的含量測定取不同批次決明子藥材粉末(過4號篩)各約1g，精密稱定。照“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備供試液，精密吸取各供試品溶液10 μl，按“2.3”項下色譜條件進樣。

3、結論      

結果測得，決明子藥材中含蘆薈大黃素平均為0.0081%，大黃酸平均為0.0079%，大黃素平均為0.0306%，大黃酚平均為0.1760%，大黃素甲醚平均為0.0883%。

本文采用高效液相色譜法同時測定決明子藥材中5種蒽醌類成分的含量，方法簡便，分離度好，結果可靠，可用于控制決明子藥材的質量。