高效液相色譜法測定食品中防腐劑

1)測定原理

試樣加溫除去二氧化碳和乙醇,調節H至近中性,過濾后進高效液相色譜儀,經反相色譜分離后,根據保留時間和峰面積進行定性和定量。

2)試劑

①氨水    1+1。

②甲醇    經0.5μm濾膜過濾。

③碳酸氫鈉溶液    20g/L。

④乙酸銨溶液   0.02mol/L。稱取1.54g乙酸銨,加水至1000mL溶解,經0.45μm濾膜過濾。

⑤苯甲酸標準貯備溶液    準確稱取0.1000g苯甲酸,加5mL碳酸氫鈉溶液(20g/L),加熱溶解,移入100mL容量瓶中,加水定容至刻度,作為儲備溶液,此溶液每毫升含苯甲酸1mg。

⑥苯甲酸標準使用溶液    吸取苯甲酸標準儲備溶液10.0mL,放入100mL容量瓶中,加水至刻度,經0.45μm濾膜過濾,該溶液每毫升相當于0.10mg的苯甲酸。

3)儀器

高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。

4)操作方法

(1)試樣處理

①果汁類    稱取5.00～10.0g試樣,用氨水(1+1)調pH約7,加水定容至適當的體積,離心沉淀,上清液經0.45μm濾膜過濾。

②汽水稱取5.00～10.0g試樣,放入小燒杯中,微溫攪拌除去二氧化碳,用氨水(1+1)調pH約7。加水定容至10～20mL,經0.45m濾膜過濾。

③配制酒類稱取10.0g試樣,放入小燒杯中水浴加熱除去乙醇,用氨水(1+1)調PH約7,加水定容至適當體積,經0.45m濾膜過濾。

(2)高效液相色譜參考條件

①柱    WG-C₁₈4.6mm×250mm,10μm不銹鋼柱。

②流動相    甲醇乙酸銨溶液(0.02mol/L)(5+95)。

③流速    1mL/min。

④進樣量    10μL。

⑤檢測器    紫外檢測器,波長230nm,0.2AUFS。

(3)測定    根據保留時間定性,外標峰面積法定量。

5)結果計算

式中    X——試樣中苯甲酸含量,g/kg;

          m^'——進樣體積中苯甲酸的質量,mg;

          V₂——進樣體積,mL;

          V₁——試樣稀釋液總體積,mL;

          m——試樣質量,g。

6)討論

①被測溶液pH對測定和色譜柱使用壽命均有影響,pH<8或pH<2時影響被測組分的保留時間,對儀器有腐蝕作用,以中性為宜。

②測定苯甲酸、山梨酸也可以用 MicroPAKCN104mm×300mm柱,流動相可用甲醇水。

③苯甲酸回收率為90%～110%,山梨酸回收率為90%～95%。