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  • 發布時間:2019-04-13 12:26 原文鏈接: 高碘酸-雪夫氏反應實驗

    實驗方法原理PAS反應顯示糖類的原理是由于含有乙二醇基的多糖類,在過碘酸的作用下,氧化產生醛基,此醛塞進而與Schiffs液作用便無色品紅變成紫紅色染料而附著于含有多糖類的組織上.

    堿性品紅+2H2SO3→品紅亞硫酸(無色)
       
    品紅亞硫酸+帶醛基物質→無色物
    實驗材料

    標本

    試劑、試劑盒

    堿性復紅HCI活性炭酸酒精

    儀器、耗材

    涂片

    實驗步驟

    一、實驗試劑:

    1. 標本選擇:一般可用于新鮮干燥的涂片,未染而長期儲存的標本也可用。如用瑞氏法染過的標本,先用酸酒精脫色然后進行PAS染色亦可.

    Schiff氏液.

    2. 配制:堿性復紅1克溶于200毫升沸水中,冷卻至60℃時進行過濾,濾后、加20毫升1N HCI再加入NaHSO32克(多加亦可),以有強烈的SO2刺鼻味為佳,塞緊瓶口過濾,液體呈淡茶色可用.之后再加入300mg活性炭過濾,濾液應透明無色.保存于4℃冰箱.

    二、實驗步驟

    1. 干燥血片或骨髓片固定于95%酒精10分鐘

    2. 蒸餾水沖洗幾次

    3. 1%過碘酸(水溶液)10分鐘(可用1-2周)

    4. 用蒸餾水沖洗幾次

    5. 放入Schiff’s液30分鐘

    6. 自來水沖洗(大約5分鐘)最后用蒸餾水沖洗,然后用2%甲綠復染20分鐘.

    積分標推:(血片計數小淋巴細胞)

    “0”    胞漿內沒有顆粒

    +       胞漿中有一圈PAS陽性顆粒

    ++      胞漿中有二圈PAS陽性顆粒

    +++      胞漿內有三圈PAS陽性顆粒,或有大團塊形成

    計數100個細胞求其積分

    正常值:(血片淋巴細胞)

    陽性率10-30%,積分12-56,均數31

    有核紅細胞積分法:

    “0”    陽性

    “+”      胞漿中分散有少量陽性顆粒或呈淺紅色,應比正常紅細胞色深

    “++”    胞漿中有1或2個濃的顆粒環,或胞漿呈中等度彌散之紅色

    “+++”  胞漿中有大量濃顆粒,或呈甚深之紅色

    正常值:有核紅積分0-7大多數陰性.

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    注意事項

    1. Schiff’s液變紅即不能再用,

    2. Schiff’s液中SO2飽和度與PAS反應的恒定性有關,NaHSO3如時間久了會失效,配出SO2達不到飽和,因此NaHSO3可多加。

    3. 堿性品紅出廠牌號與染色深淺有關,加NaHSO3過夜后仍為紅色則說明染料不合用.

    4. 活性炭可以多加,其目的在于吸附顏色,如系品紅不合用多加活性炭顏色亦不能被吸附.

    5. 配制Schiff’s液器械需十分清潔干燥。

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