彗星實驗高通量實驗過程的新方法
單細胞凝膠電泳,或者我們稱之為彗星實驗,作為研究DNA損傷的形成和修復,吸引了越來越多研究者的興趣。此外,彗星實驗不再局限于應用在院校和科研機構。現在,越來越多的相關工業企業對彗星實驗有了顯著的興趣,例如制藥企業中的遺傳毒性藥物篩選。事實上,彗星實驗為醫藥行業的推進和發展提供了巨大的動力。
不論用什么方法做彗星實驗,這幾個步驟都是必須需要的(如圖1).其中載玻片是實驗的基礎原件,把含有細胞的瓊脂糖凝膠,用蓋玻片封存在載玻片上,用以后續操作。這些小而薄的瓊脂糖凝膠十分脆弱,在每一次操作的步驟中都有被損壞的危險,從而危及試驗的成功。也浪費了寶貴的時間,最為一個典型的彗星實驗,可能需要40個載玻片試樣進行試驗,把它們放在一個大尺寸的電泳槽中,進行彗星實驗。能同時運行40個載玻片的電泳槽尺寸,常常成為一個很難解決的問題,通常情況下,這個電泳槽的尺寸要達到33*59cm,為了給它進行冷卻,冷卻槽的尺寸必須要更大,要達到60*75cm。這將占用很大的地方,不方便進行試驗。
通常情況下進行一次彗星實驗差不多要占用3天的時間,去量化DNA的損壞程度。隨著高通量技術的發展,很明顯彗星載玻片的處理過程成為整個彗星實驗的瓶頸。到現在為止沒有更好的辦法去提高彗星載玻片的操作過程,從而提高彗星實驗的效率。北京興聯商貿有限公司提供一款新式彗星電泳槽系統,較少了電泳槽的占地尺寸,同時提高了整個彗星實驗的處理速度。整個電泳槽系統配備兩個載玻碟,每個載玻碟上可以放置25個載玻片。這種設計不僅降低了載玻片上凝膠被破壞的風險,同時也提高了彗星實驗的速度。
左面為傳統的彗星電泳槽,占地面積大,需要更大尺寸的冰桶進行冷卻。右面的使我們提供的高通量彗星電泳儀。占地面積小,底層帶有冷卻槽,不用配置冰桶進行冷卻。
方法
材料:通過我們特制的高通量載玻架(如圖),可以同時運行25個彗星實驗載玻片試樣。該載玻架設有凹槽,載玻片可以插入凹槽,豎直放置。載玻架可以完全放置在我們的彗星電泳槽中(見圖片)。
過程:在載玻片上把試樣細胞形成固定的瓊脂糖凝膠層,通過大約一整夜的時間進行裂解,形成所需的彗星電泳試樣。傳統的方法是,逐個放在電泳槽底部,進行電泳,然后把電泳過后的載玻片取出,再進行后續的染色,中和,洗滌等過程。每個載玻片都需要處理,不僅浪費時間,同時載玻片上的凝膠層也容易在遷移的過程中遭到破壞,從而影響實驗結果。我們新設計的高通量電泳槽很好的解決了這個問題。所有制作好的載玻片全部豎直插入載玻架上,該載玻架可以整體放入高通量電泳槽內進行電泳。電泳完成后,無需逐個取下載玻片。我們會提供清洗盒,染色盒,中和盒進行后續操作,是載玻架可以整體放入各個盒體中,提高了試驗效率,同時降低了試樣被破壞的風險。
引用資料
1.Novel method for the high-throughput processing of slides for the comet assay Nature.2014-11-26[引用日期2016-11-14]
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