實驗方法原理
用雞胚制備培養雞胚成纖維細胞。
實驗材料 9 日齡雞胚
試劑、試劑盒 70% 乙醇胰酶／EDTA無添加 MEM 培養基完全 MEM-10 培養基
儀器、耗材 無菌解剖剪無菌鑷子100 cm2 無菌培養皿10 ml 注射器無菌胰酶消化瓶（帶磁力攪拌棒）CO2 培養箱500 ml 燒杯紗布 Sorvall 離心機250 ml 離心管150 cm2 組織培養瓶
實驗步驟
1. 將 10 只 9 日齡雞胚有空氣部分朝上放置，噴上 70% 乙醇。
2. 用無菌的解剖剪將雞蛋的頂部打開，剪掉膜上蛋殼，使膜保持完整。用無菌鑷子將膜取掉。其他雞蛋亦重復相同操作。
3. 取出雞胚，放入無菌的 100 cm2 培養皿。
4. 剪掉每個雞胚的頭和足，將剩余的身體放入無菌的 100 cm2 平皿中，加入 10 ml 無添加劑的 MEM 培養基。通過 10 ml 注射器（5 個雞胚/注射器）擠壓，將雞胚切碎并打人無菌的胰酶消化瓶中。
5. 加入 100 ml 37℃ 的胰酶/EDTA，并在加濕的 5% CO2 培養箱中 37℃ 持續攪拌溫育 5 min。
6. 將液體從無菌胰酶消化瓶中倒人杯口帶兩層紗布的 500 ml 燒杯，將過濾后的液體轉移至 250 ml 離心瓶中。
7. 向含有剩余組織的無菌胰酶消化瓶中加入 100 ml 新鮮的胰酶/EDTA，37℃ 溫育。
8. 將消化液倒入另一個杯口帶兩層紗布的 500 ml 燒杯，并將過濾后的液體加入先前的 250 ml 離心瓶中。
9. 在 Sorvall RC-3B 離心機中，4℃，1200 g 離心 10 min。
10. 丟棄上清，加入 10 ml MEM-10 完全培養基，反復抽吸 10～15 次重懸沉淀，并將體積調整至 100 ml。
11. 將懸液轉移至 250 ml 離心瓶中，4℃，1200 g 離心 10 min。
12. 用 5 ml MEM-10 完全培養基重懸沉淀，并將體積調整至 30 ml。
13. 將細胞懸液按每瓶 1 ml 加入到 30 個含有 30 ml MEM-10 完全培養基的 150 cm2 組織培養瓶中。
14. 37℃ 培養幾天直至細胞長滿，然后將培養瓶轉移至加濕的 5% CO2 培養箱中 31℃ 保存。
CEF 細胞培養液能夠在 31℃ 保存 2～3 個星期。原代的 CEF 細胞也能直接用于病毒生長，或將胰酶處理后的 CEF 細胞凍存在液氮中留以后使用。
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