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  • 發布時間:2019-12-11 11:22 原文鏈接: 雞ELISA試劑盒實驗結果與測定

    雞ELISA試劑盒由補體引起的干擾可通過下述方法避免:

    (1)對臨床血清標本加熱滅活補體:采用56~C30 min加熱可使標本中的補體C1。滅活。

    (2)包被或酶標二抗使用特異的雞抗體:雞抗體不激活人的補體系統,因此,使用特異的雞抗體,不會出現因補體激活而存在的假陽性和假陰性干擾。

    異嗜性抗體(heterophilieantibodies) 人類血清中含有抗嚙齒類動物(如鼠、馬、羊等)的免疫球蛋白(1g)的抗體,即天然的異嗜性抗體。有研究表明,天然的異嗜性抗體(1gG)可分為兩類,一類(85%的假陽性由其引起)可結合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區域,但不與兔IgG的Fab區結合。另一類(15%的假陽性由其引起)可結合于小鼠、馬、牛和兔IgG的Fc區表位,但不與山羊和大鼠IgG的Pc區表位結合。異嗜性抗體可通過交聯固相和酶標的單抗或多抗而出現假陽性反應。由異嗜性抗體引起的干擾可通過下述方法避免:

    (1)雞ELISA試劑盒使用特異的兔F(ab’)2。片段作為固相或測定酶標抗體。

    (2)在標本或標本稀釋液中加入過量的動物Ig,封閉可能存在的異嗜性抗體。但加入量不足或亞類不同時無效。

    (3)使用靶特異的非Ig親和蛋白(affibody)替代固相或酶標抗體之一。采用噬菌體展示技術展示來自單個金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)聯合文庫的人IgA結合親和蛋白,用于IgA的測定,不受異嗜性抗體的影響。

    (4)使用特異的雞抗體作為固相和測定抗體。

    4.因使用鼠抗體治療或診斷誘導的抗鼠Ig抗體 在臨床上,有嘗試使用鼠源性單克隆抗體進行靶向治療,及使用放射性核素標記鼠源性單克隆抗體進行影像診斷等,均有可能使相應患者體內產生抗鼠抗體。這種抗鼠抗體對使用鼠源性單克隆抗體的酶免疫測定,可產生假陽性結果。由抗鼠抗體引起的干擾可通過下述方法避免:

    (1)使用特異的抗體F,bf):片段作為固相或測定酶標抗體。

    (2)在標本或標本稀釋液中加入過量的鼠Ig,封閉可能存在的抗鼠抗體。

    (3)使用特異的雞抗體IgG作為固相和測定抗體。雞IgG不與人抗鼠抗體反應。因而,用其作為固相或酶標抗體不會出現假陽性結果。

    5.自身抗體 自身抗體如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等,能與其相應靶抗原結合形成復合物,在ELISA試劑盒方法中可干擾相應抗原抗體的測定。為避免以上情況出現,可在測定前用理化方法將其解離。

    6.雞ELISA試劑盒溶菌酶 溶菌酶可與等電點較低的蛋白有強的結合能力。免疫球蛋白等電點約為5,因此,在雙抗體夾心法ELISA試劑盒測定中,溶菌酶可在包被的IgG和酶標的IgG間形成橋接,從而導致假陽性。因此,為保證雞ELISA試劑盒測定的可靠性,有必要從標本中去除溶菌酶或將其封閉,Cu2+離子和卵白蛋白可有效地封閉溶菌酶,防止其連接IgG。

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