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用于檢測植物組織RNA的原位雜交法（一）組織切片制備l 植物組織的甲醛固定和包埋1．將植物組織切成小塊，立即放入一個裝有10～50ml固定劑溶液的燒杯中，把燒杯放到真空脫水機內。調節真空度以形成一個溫和的真空，然后慢慢恢復常壓。微量便于固定劑滲入組織，必須反復真空和非真空狀態。待固定劑充分滲入組織塊后，室溫下放置2～3小時。2．室溫下用50～100ml 50mmol/L PIPES緩沖液（pH6.8）漂洗組織塊20分鐘。3．室溫下將組織塊先后放在不同稀釋度的乙醇水溶液（25％，50％，75％和100％）中脫水。每個梯度取50～100ml，各培養20分鐘。4℃下用50～100ml 100％乙醇培育組織塊，脫水過夜。溫和的搖動或攪動可以促進組織中溶劑的交換。4．第二天上午，將組織塊轉移到50～100ml新的100％乙醇中。再脫水30分鐘。5．室溫下用不同稀釋度的二甲苯乙醇溶......閱讀全文
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
Angerer及其同事們首先應用RNA探針于原位雜交（見Cox et al 1984），核酸探針為單鏈的RNA分子，產生自具有質粒逆轉錄系統的cDNA克隆（圖20-2）。由于它是單鏈的，不像雙鏈的DNA探針，在溶液中不會再退火（reanneal），因此，較大百分比的探針可參與雜交反應，較cDNA探針
二、生物素標記cRNA探針在原位雜交組織化學中的應用 （一）光敏生物素標記cRNA探針的應用 以線性質粒DNA為模板合成未加標記物的cRNA探針，使其最終濃度為0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再與等體積的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦鹵素燈下，距離光源20c
PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非這性聚丙烯酰胺凝膠上，短的單鏈DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同構象，一個堿基的改變將影響其構象而導致其在凝膠上的移動速度改變。其基本原理為單鏈DNA在中性條件下會形成二級結構，這種二級結構依賴于其堿基組成，即使一個堿基的不同，也會形成不同的二
摘要：本文論述了轉基因農產品、食品的安全性問題以及對轉基因食品從基因、基因轉錄、基因翻譯表達三個層面的檢測技術做了概述。 關鍵詞：轉基因食品 轉基因農產品 食品安全 生物技術 檢測技術 Abstract: discuss on the question Genetically modifi
摘要：基因芯片技術是90年代中期以來快速發展起來的分子生物學高新技術，是各學科交叉綜合的嶄新科學。其原理是采用光導原位合成或顯微印刷等方法，將大量DNA探針片段有序地固化予支持物的表面，然后與已標記的生物樣品中DNA分子雜交，再對雜交信號進行檢測分析，就可得出該樣品的遺傳信息。基因芯片技術目前國
摘要：基因芯片技術是90年代中期以來快速發展起來的分子生物學高新技術，是各學科交叉綜合的嶄新科學。其原理是采用光導原位合成或顯微印刷等方法，將大量DNA探針片段有序地固化予支持物的表面，然后與已標記的生物樣品中DNA分子雜交，再對雜交信號進行檢測分析，就可得出該樣品的遺傳信息。基因芯片技術目前國內
生物芯片技術是隨著"人類基因組計劃"(human genome project, HGP)的進展而發展起來的，它是90年代中期以來影響最深遠的重大科技進展之一，它融微電子學、生物學、物理學、化學、計算機科學為一體的高度交叉的新技術，具有重大的基礎研究價值，又具有
摘要：本文論述了轉基因農產品、食品的安全性問題以及對轉基因食品從基因、基因轉錄、基因翻譯表達三個層面的檢測技術做了概述。 關鍵詞：轉基因食品 轉基因農產品 食品安全 生物技術 檢測技術 Abstract: discuss on the question Gen
植物病毒病是農業生產上一種重要病害，嚴重影響農作物的產量和質量, 目前還沒有1種治療效果較理想的藥劑，對發病植株做到早期診斷及提前檢測就顯得尤為重要。植物病毒學歷經近百年的發展，植物病毒的檢測方法與手段也在不斷發展與改進。常用的方法有侵染力測定法、血清學方法、電子顯微鏡計數和分子生物學法等。1.1侵
基因芯片技術及其研究現狀和應用前景生物芯片技術是隨著“人類基因組計劃”（human genome project，HGP）的進展而發展起來的，它是90年代中期以來影響最深遠的重大科技進展之一，它融微電子學、生物學、物理學、化學、計算機科學為一體的高度交叉的新技術，具有重大的基礎研究價值，又具
納米二次離子質譜技術(NanoSIMS)在 微生物生態學研究中的應用氮(N)、碳(C)、硫(S)等生命元素的生物地球化學循環過程主要由微生物所驅動。 耦合分析自然環境中 微生物遺傳多樣性與其代謝多樣性是當今微生物生態學研究的難點和熱點。 自然環境中的微生物多樣性極 為豐富,每噸土壤中的微生物類
實驗材料核苷酸 &n
實驗材料核苷酸試劑、試劑盒冰水8-羥基喹啉秋水仙素固定劑酶解緩沖液儀器、耗材載玻片玻璃蓋玻片解剖針及鑷子實驗步驟原位雜交的基本操作方法（圖 14 .2 ) 演化自 Southern 雜交：標底是玻片上的染色體和細胞核，探針是帶標記的待測 DNA 序列 [ 本書中即是轉基因和對照，圖 14.3(a)
地高辛檢測試劑盒 DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I貨號: 11745832910羅氏科學應用部（Roche Applied Science）是最早致力于向用戶提供非放射標記技術的公司之一，讓更多的科研工
3.2 染色體制備無論是熒光染色還是 FISH，分裂期和分裂間期的染色體制備均于載物片上進行。建議使用蛋白水解酶對材料進行預處理，以去除細胞壁和細胞質，再將樣品置于載玻片上，滴上乙酸，然后蓋上玻片壓片。所有操作均于室溫下進行，除非是特殊說明。在洗滌和材料準備時使用小培養皿，方法見 2. 2 節。(