2013年3月19日,由北京理化分析測試技術學會和北京市電鏡學會主辦的2013年度激光共聚焦掃描顯微學最新進展學術研討會在北京北科大廈成功舉辦。本次研討會以推動北京市及周邊省市激光共焦掃描顯微學的進步和發展,提高廣大相關工作者的學術及技術水平,促進上述學科在生命科學等領域中的應用和發展為目的。邀請了來自清華大學、北京大學、北大醫學部、生物物理所及國家納米中心等科研院所的專家教授作前沿學術報告。另外還有來自蔡司公司、徠卡儀器、安道爾公司、GE公司以及奧林巴斯(中國)有限公司的應用工程師向在會人員展示了他們最新的產品技術。
2013年激光共聚焦掃描顯微學最新進展學術研討會場
本次研討會的主持人是來自北京市軍事醫學科學院的張德添教授,他簡單的介紹了一下本次會議的目的和流程,隨后研討會正式開始。
清華大學 祁海教授
來自清華大學的祁海教授作了《雙光子在體成像技術與免疫細胞原位動態研究》的報告。
蔡司公司 張超工程師
蔡司公司的張超工程師作了《蔡司最新激光層照顯技術在生物學中的應用》報告,主要介紹了一項新的顯微技術,即激光層照顯微鏡(Lightsheet Z.1),并介紹了它的成像原理、主要特點及其應用領域。
Lightsheet Z.1的光照光束(層照光束)只會照亮樣本很薄的一層,因而起到保護樣本其他部分的作用;并且它的成像光束與光照層成90度角,因此,Lightsheet Z.1能在最小的照明強度下獲得最好的圖像質量,尤其適合于活體樣本的長期試驗;基于CCD/sCMOS的圖像采集,能夠檢測弱信號;可以提供模式生物的活體培養環境并能融合多角度成像,任意角度旋轉樣品,適合厚樣品成像。Lightsheet Z.1可以應用到一下領域:斑馬魚、果蠅等模式生物的胚胎發育研究;胚胎組織發育的快速成像;組織培養的3D成像;海洋生物組織成像以及其他活體或固定的較大生物體。Lightsheet Z.1這給生物學家帶來了在活體生物動態成像研究上的新方法。
北京大學 王世強教授
來自北京大學的王世強教授作了《心力衰竭細胞機制的顯微成像研究》。
徠卡公司 吳立君博士
來自徠卡公司的吳立君博士作了《徠卡共聚焦顯微鏡新進展》的報告。分別介紹了Leica的HyD,MP,WLL,STED等的新進展。Lecia HyD是適用于各種用途的高靈敏探測器。它能為所有樣本提供最佳的動態范圍、高靈敏度提高細胞活性、高速成像、光子計數模式提供真正量化的實驗結果、和快掃計數實現完美組合并且用戶可自行選擇。MP多光子顯微鏡新的鍍膜計數提高了系統的通透性,特定的光學系統提供最大化的光子效率,光學系統的“4f”設計保證均勻的視場照明。The new WLL2采用的白激光技術,提供了高圖像反差的光閘技術、高達同時8條可調譜線,3萬億個獨特組合以及應用于FLIM和gSTED的脈沖激發光源等。
北大醫學部 何其華老師
來自北大醫學部的何其華老師作了《Confocal中F技術的應用與比較(FRAP,FRET,FCS和FLIM)》。何老師先主要介紹了F技術的四個應用FRAP(熒光漂白恢復)、FRET(熒光共振能量轉移)、FLIM(熒光壽命成像)、FCS(熒光相關光譜)的特點及其應用。F技術應用的主要特點是蛋白質功能檢測包括分子的運動特性以及分子之間相互作用。
FRAP和FLIP應用于活細胞,但其只適合檢測運動速度相對較慢的分子。FCS/FCCS主要應用于單分子水平、高敏度,它也不適合運動慢或不動分子,易對樣品產生光漂白且FCCS會受crosstalk影響。FRET單個固定細胞或活細胞原位生理環境下檢測分子間直接相互作用,但FRET所受客觀因素的影響太多,如待測分子濃度、光漂白等,因此重復性不夠好。雙光子+FLIM則可以對細胞中蛋白質的相互作用的發生給出精確定位。最后何老師還給出了F技術在FRET-FCS、TIRF-FCS、FLIM-FCS、Scanning-FCS的未來展望。
安道爾公司 鄧小衛工程師
來自安道爾公司的鄧小衛工程師作了《轉盤式共聚焦最新進展》報告。首先介紹了轉盤式共聚焦的特點,它能保持細胞活性(靈敏度)且能快速記錄細胞信號變化(速度)。但其也有一些缺點如單張照片質量不如點掃描共聚焦、原生無FRAP/TIRF等功能等。而新的CSR-W1掃描頭增加了新功能分別為Upconversion,生物醫學光子學的新星、提供紅外激光輸入端口可輕易升級為upconversion或者MP系統并提供direct bypass模式,對于TIRF和寬場成像效果更好,幾乎沒有光損失。
轉盤式共聚焦在最新的發展中,目前有著最新科技的掃描頭CSU-W1、最靈敏快速的探測器、能精確同步控制、ZL的脈沖激光系統并擁有者專業的軟件及系統開放性。
生物物理所 徐平勇研究員
來自生物物理所的徐平勇研究員作了《熒光蛋白探針與超高分辨顯微成像》報告。
GE公司 楊淑靜工程師
來自通用電氣(GE)公司的楊淑靜工程師作了《高速超高分辨光學成像進展:DeltaVision OMX系統》報告。從2009年到2012年的發展中,OMX的功能也在逐漸提升和加強,如獨有的光路設計:高光子效率、多通道同時成像;強大的成像功能包括3D-SIM快速超分辨成像,TIRF/定位顯微鏡:環狀TIRF、熒光定位專有的混合模型算法;廣角熒光成像、多達4個通道同時。具體3D-SIM工作的過程則是:利用一個3D結構的光圖像從樣本中獲得更高分辨率的信息;利用標準染料和熒光蛋白;廣闊的成像技術(不是共焦的)。OMX在1秒鐘可產生135張圖像,分辨率提升到原來的8倍。
DeltaVision OMX超高分辨率顯微鏡具有以下特點:高速的3D-SIM信號的發生器;先進的高速~200美國激光快門;硬件自動聚焦標準;6種激光器可選擇,405,440,488,514,568,642;可選擇4sCMOS或EMCCDs*相機。
國家納米中心 戴陸如教授
來自國家納米科學中心的戴陸如教授作了《超高分辨率熒光顯微鏡中的單分子定位算法》報告。戴教授的主要思想是:觀察獨立的單分子信號而不是所有的熒光團;信號源的識別和定位;重現檢測到的分子坐標的超分辨率圖像。
定位算法的主要步驟是:信號源的識別;定位;圖像重現。
奧林巴斯公司 位鵬
來自奧林巴斯公司市場部的位鵬作了《奧林巴斯特殊鏡頭介紹》報告。報告中主要介紹了奧林巴斯的超級鏡頭組。分別介紹了60X超級色差校隊鏡頭、硅油物鏡、長工作距離高數值孔徑物鏡、多光子專用鏡頭和25X ScaIView系列鏡頭以及新TIRF鏡頭。
研討會后,各專家教授與廠商工程師進行自由交談,這次研討會圓滿的結束。
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