2020版藥典解讀四生物毒素類污染殘留的操作與變化2

【附注】
1. 本實驗應有相應的安全、防護措施，并不得污染環境。
2. 殘留有黃曲霉毒素的廢液或廢渣的玻璃器皿，應置于專用貯存容器（裝有10%次氯酸鈉溶液）內，浸泡24小時以上，再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。

二、2020版藥典相比2015版藥典檢測黃曲霉方法變化解讀

三、SN/T 4604-2016 進出口中藥材中真菌毒素的測定（節選）

1. 范圍
本標準規定了進出口中藥材中黃曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2、M_1、M₂，赭曲霉素A，伏馬毒素B_1、B₂，T-2毒素，HT-2毒素，二羥基苯甲酸內脂類真菌毒素的液相色譜-質譜/質譜檢測方法。
本標準適用于進出口當歸、桔梗五味子、枸杞、大青葉、金銀花、地龍中黃曲霉素B_1、B_2、G_1、G_2、M_1、M₂，赭曲霉素A，伏馬毒素B_1、B₂，T-2毒素，HT-2毒素，二羥基苯甲酸內脂類真菌毒素的液相色譜-質譜/質譜檢測方法。
2. 分析步驟
(1) 提取
稱取5g試樣(精確到0.01g)置于50 mL具塞塑料離心管中，加人1g氧化鈉，再加人PBS溶液25 mL，均質提取2 min，5000 r/min離心10 min，將全部上清液用玻璃纖維濾紙過濾后得提取液A；向殘渣中加人25 mL甲醇，均質提取2 min，5000 r/min離心10 min，取上清液10 mL，用PBS稀釋至100 mL，用玻璃纖維濾紙過濾后得到提取液B。
(2) 免疫親和柱凈化
稱取5g試樣(精確到0.01g)置于50 mL具塞塑料離心管中，加人1g氧化鈉，再加人PBS溶液25 mL，均質提取2 min，5 000 r/min離心10 min，將全部上清液用玻璃纖維濾紙過濾后得提取液A；向殘渣中加人25 mL甲醇，均質提取2 min，5000 r/min離心10 min，取上清液10 mL，用PBS稀釋至100 mL，用玻璃纖維濾紙過濾后得到提取液B。
將免疫親和柱連接于10 mL玻璃針筒下,將50 mL提取液B全部通過免疫親和柱(PriboFast^?復合免疫親和柱)(流速控制在1滴/s~2滴/s)然后用10 mL含0.1%吐溫的PBS淋洗親和柱，再將5mL提取液A通過免疫親和柱（流速控制在1~2滴/S）。待提取液全部通過親和柱，用5mL含0.1%吐溫的PBS和20mL水淋洗親和柱，直至空氣進入親和柱，棄去全部流出液；用2 mL甲醇淋洗親和柱(流速控制在1滴/S)，當甲醇大部分過柱時，停止加壓，靜置孵育5 min，再用2 mL甲醇淋洗親和柱(流速控制在1滴/S)，收集全部淋洗液；將淋洗液置于40℃下水浴氮氣吹干，用1 mL甲醇-2 mmol/L乙酸銨溶液(含0.1%甲酸)(40：60體積比)溶解殘渣，過0.22 μm有機系濾膜，用液相色譜-質譜/質譜測定。

四、復雜中藥材樣品測定解決方案

針對目前藥典方法檢測中藥材中黃曲霉毒素過程中出現的決明子、遠志、檳郎等個別樣品基質復雜，凈化效果差，譜圖中雜質峰過多的問題，普瑞邦技術中心制定了一套針對中藥材前處理的解決方案。應用此解決方案進行樣品前處理，經高效液相色譜柱后光化學衍生進行檢測可達到較好的凈化效果，雜峰明顯減少，使分析結果更加準確。供廣大同行老師參考：

圖1 方法優化后（左）與優化前（右）遠志樣品過柱對比

圖2 方法優化后遠志樣品加標與標準品疊加對比

圖3 方法優化前遠志樣品加標與標準品疊加對比

五、Auto IPS-6060 全自動免疫親和操作儀應用于藥典中黃曲霉毒素測定

通過Auto IPS-6060 全自動免疫親和操作儀在2015版藥典中檢測黃曲霉的案例，對比手工的精密度和回收率。全自動免疫親和操作儀不但在具體的方法操作和技術運用上更加先進，而且在整個分析過程中都有非常嚴格的質量控制和質量保證，確保分析結果準確，排除人為操作造成的實驗誤差。

黃曲霉毒素B、G混標
表1：精密度與回收率比對表

*注：上表采用遠志樣品，按照10μg/kg進行添加。
表2：成本及操作比對表

*注：上表按照4支柱子進行對比。
Auto IPS-6060 全自動免疫親和操作儀在進行過免疫親和柱實驗中得到了優于手動過柱的結果，通過比對不難發現，Auto IPS-6060 全自動免疫親和操作儀在回收率和精密度方面有所提高，大大節省了人力以及時間成本，同時也縮短了實驗人員接觸試劑的時間，最大程度地保證了實驗人員的安全。

六、中藥材黃曲霉毒素測定采購指南

*備注包括1年免費保修和終身維護(反應池和納米燈管除外).

七、中藥材黃曲霉毒素測定常見問題舉例

1. 樣品中目標峰保留時間發生偏移
2. 部分中藥材前處理不干凈，液相雜峰多
3. 樣品中峰的定性判斷
4. 遠志、檳郎等過柱困難的樣品處理
5. 液相色譜峰拖尾或前沿
6. 色譜柱如何維護
7. 標準品的保存與分解
8. 樣品加標回收的方法
9. 曲線線性不好
10. 基線不平，噪音大
 
注：如有問題請與我們聯系！
此文件僅供參考，具體內容以2020版藥典為準。
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