圖1. Knox曲線的比較。Column：TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.0mmI.D.×5cm)；Sub-2μm ODS columns (2.1mmI.D.×5.0cm)；Eluent：H2O/CH3CN=50/50 Detection: UV (254nm) Temp.：25℃；Inj. vol.： 2μl；Sample：Naphthalene。
一種新型可應用于高通量HPLC分析的 亞3微米ODS柱－TSKgel ODS-140HTP2.3μm被成功開發。本實驗考察了該種填料的基本性質和梯度下的色譜行為，并將該柱應用于中藥樣品的高通量分析，取得良好的效果。
實驗部分
儀器和主要試劑
ACQUITY UPLC （美國Waters），HLC 8020高效液相色譜儀（日本Tosoh），甲醇（德國Merck），乙腈（德國Merck），其它試劑均為AR級。
圖2. 不同流速下柱壓和柱效的比較。Column：TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.0mmI.D.×10cm) ；Eluent：H2O/CH3CN =50/50 detection：UV (254nm) ；Temp.：25℃；Inj. vol. ：2μl ；Samples：1. Uracil,2. Benzene,3. Toluene,4. Naphthalene。
色譜條件
色譜柱：TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.1 mmI.D. × 5 or 10 cm)、TSKgel ODS-100V 3μm (4.6 mmI.D. × 15 cm)、Acquity BEH C18 (2.1 mmI.D. × 5 cm or 10 cm)、Zorbax Eclipse C18 (2.1 mmI.D. × 5 cm or 10 cm)、Hypersil Gold C18 (2.1 mmI.D. × 5 cm)。
圖3. 不同流速下柱壓的比較。Column: TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.0mmI.D.×5cm); Sub-2μm ODS columns (2.1mmI.D.×5.0cm); Eluent: H2O/CH3CN=50/50 Detection: UV (254nm) Temp. : 25℃；Inj. vol.: 2μl Sample: Naphthalene.
結果與討論
基本性質考察
圖4. 連續梯度運行下柱效變化。Column：TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.1mmI.D.×10cm); Eluent: （A）H2O/MeOH（90/10）, （B） H2O/MeOH（50/50）,（C） MeOH; Flow rate: 0.6ml/min; Temp.: 25℃;Step gradient：A→B→C （for 5min each step，30min interval；Press.：（A） 45MPa，（B） 59MPa，（C）32MPa 。
實驗比較了TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色譜柱和3種亞2微米ODS色譜柱的Knox曲線，結果見圖1。實驗結果表明，在考察線性流速范圍內，TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色譜柱和3種亞2微米色譜柱的Knox曲線非常近似，說明新型2.3μm的ODS填料的色譜柱其裝填效果較好。在不同流速下對色譜柱柱效進行了考察，結果見圖2。實驗結果表明，該色譜柱在接近1 ml/min的流速下仍可保持較高的柱效，說明該柱可用于高流速下的快速分析。不同流速下的柱壓變化的比較結果見圖3，實驗結果表明，在相同的流速條件下，TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色譜柱的柱壓降僅相當于亞2微米ODS柱的二分之一到三分之一。1100次梯度運行實驗前后色譜柱的柱效變化情況見圖4。實驗結果表明，該色譜柱在高流速下具有良好的使用耐久性。
圖5.白首烏的色譜圖。
應用
采用10 cm柱長的TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色譜柱對中藥白首烏總提物樣品進行分離實驗，并在色譜柱上限壓力下和相同的梯度體積的條件下與10 cm柱長的1.7μm ODS色譜柱進行了對比分離實驗（圖5，圖6）。實驗結果表明，TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色譜柱可以在更快的流速和更低的柱壓降的條件下進行中藥樣品的高通量分析。
圖6. 壓力變化曲線。Eluent: （A）H2O, （B）ACN; Gradient for 2.3μm Column: 0min（B 5%） →0.48 min （B 5%）→1.6 min（B 30%）→6.0 min（B 68%）→ 6.1 min（B 100%）→20min（B100%）, Column temperature 40℃. Gradient for 2.3μm Column: 0min（B 5%） →0.68 min（B 5%）→2.28 min（B 30%）→8.57min（B 68%）→ 8.70 min（B 100%）→20min（B100%）, Column temperature 40℃.
結論
新型2.3μm ODS色譜柱的裝填性能良好。在相同流速下、相同柱長條件下，相比常規的5微米或3微米ODS柱，該柱在較寬的線性流速范圍內均表現出很高的柱效；相比常規的亞2微米ODS柱，該柱在較寬的線性流速范圍內柱壓降較小，在乙腈/水的流動相體系下，該柱的柱壓降僅為亞2微米的ODS柱1/2左右；在1.0ml/min的高流速下，色譜峰分離度未見有明顯下降。實驗結果表明，該種色譜柱除可配套用于超高壓液相系統外，更可在常規HPLC系統壓力下進行高通量HPLC分析。
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