32P標記裂解培養細胞實驗——SDS煮沸法裂解細胞

待標記的培養細胞固相化金黃色葡萄球菌（可選）

37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)SDS裂解緩沖液RIPA 校正液免疫沉淀洗液

橡皮細胞刮子Sorvall 冷凍離心機(或其他)樹脂玻璃薄板／4℃ 樹脂玻璃管架沸水浴

1. 標記和洗滌細胞（基本方案步驟1～7）。

2.1 對于貼壁細胞：加入適量 SDS 裂解液至培養皿中。35 mm 培養皿加 0.1 ml，50 mm 培養皿加 0.25 ml，100 ml 培養皿加 0.5 ml。立即用橡皮細胞刮子刮下細胞并轉移至帶螺口蓋的微量離心管中。

2.2 對于非貼壁細胞：在渦旋混合器上短暫振蕩細胞沉淀使之松散，每 5×10⁷細胞加入 1 ml SDS裂解緩沖液，再次振蕩。

3. 煮沸 2～5 min，加入 4 體積的 RIPA 校正液，充分混勻。

4. 于 4℃ 以 26000 g 離心 90 min 或在冷凍離心機上以最大速度離心以澄清細胞裂解液。

5. 如常進行免疫沉淀，并用免疫沉淀洗液進行洗滌。

細胞裂解液也可再加入 50 μl 固定化的金黃色葡萄球菌，于 4℃ 以 26000 g 離心 30 min 澄清。