高親和力高純度零污染的細胞培養級抗體制備指南
單克隆抗體(monoclonal antibody，MAb)，是針對專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年，主要原理是利用產生抗體的B細胞與骨髓瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。目前大量制備單抗的方法主要有兩種方法：一種是動物體內生產法（腹水制備），在小鼠腹腔內接種雜交瘤細胞，雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖，并產生和分泌單克隆抗體，約1-2周，可見小鼠腹部膨大，用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體；另一種是細胞體外培養法，將雜交瘤細胞置于培養瓶中進行培養，在培養過程中，雜交瘤細胞產生并分泌單克隆抗體，收集培養上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。單克隆抗體的制備流程腹水制備法操作簡單、制備成本低，是目前國內生產抗體的主要方式，但是，得到的腹水常混有小鼠的各種雜蛋白（包括Ig），而且還有污染動物病毒的危險。而體外培養法通過轉瓶培養制備的細胞培養級抗體，不但不含小鼠雜蛋白和動物病......閱讀全文
抗體的制備
? 為了研究抗體的理化性質、分子結構與功能，以及應用抗體于臨床疾病的診斷、治療及預防都需要人工制備抗體。目前，根據制備的原理和方法可分為多克隆抗體、單克隆抗體及基因工程抗體三類。 一、多克隆抗體 大多數抗原是由大分子蛋白質組成，但只是抗原上有限部位的特殊分子結構能與其相應抗體結合，稱此部位為抗原
怎樣制備熒光抗體？
(一)抗體要求將熒光素與特異性抗體以化學共價鍵的方式結合而成。一般需經純化提取IgG后再作標記。(二)熒光素要求 異硫氰酸熒光素最常用要求：①應具有能與蛋白質分子形成共價鍵的化學基團，與蛋白質結合后不易解離，而未結合的色素及其降解產物易于清除；②熒光效率高，與蛋白質結合后，仍能保持較高的熒光效率；③
熒光抗體的制備
1? ?熒光素與抗體結合（標記）??2? ?熒光抗體的純化??3? ?熒光抗體的鑒定??1.熒光素與抗體結合方法：? ? ⑴ 透析法：①適用于蛋白質含量低、樣品體? ?? ?? ?? ?? ?? ???積小的抗體溶液的標記? ?? ?? ?? ?? ? ②標記較均勻，非特異熒光較低??? ? ⑵ 攪
人工制備抗體制備方法有哪些
抗體在疾病的診斷和免疫防治中的重要作用，使人們對抗體的需求越來越大。人工制備抗體是大量獲得抗體的重要途徑。早年人工制備抗體的方法主要是以相應抗原免疫動物，獲得抗血清。由于抗原常常含有多種不同的抗原表位，加之所獲得的抗血清也未經免疫純化，因此，獲得的抗血清實際上是含多種抗體的混合物，即多克隆抗體(po
抗肽抗體的制備
實驗材料 抗體試劑、試劑盒 磷酸鈉緩沖液MBS二甲基酰胺EDTAPBS儀器、耗材 分光光度計離心機實驗步驟 1. ?將10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉緩沖液中，置于一個2 ml 的玻璃試管，加50 μl MBS/DMF溶液，于室溫下溫和攪拌30 min。?2
多克隆抗體的制備
多克隆抗體的制備?1. 器材：?剪刀（剪兔毛用）一把、彎頭眼科手術鑷子（游離血管用）一把、直頭眼科手術剪（剪血管用）一把，手術刀架，手術刀片，注射器(1ml、10ml，25ml)附針頭，兔子固定架，滅菌三角燒瓶(200ml)或平皿（直徑 18cm）、彎頭止血鉗四把，直頭止血鉗兩把，手術縫合線，塑
多克隆抗體制備
1. 免疫動物：兩只新西蘭兔?2. 佐劑：首先用完全弗氏佐劑（CFA），后用不完全弗氏佐劑（IFA）。?3. 免疫原：蛋白或KLH偶聯的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。?4. 免疫：用生理鹽水稀釋免疫原，然后與相應的佐劑進行1:1混合。抗原和佐劑完全混合形成穩定的乳劑，將該乳劑在兔子雙肩周圍
抗體的制備有哪些
（1）多克隆抗體的制備。①免疫方法：對多克隆抗體，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮內免疫法、淋巴結免疫法和混合法等。一般來說，皮下或肌肉免疫法產生的抗體比較多；皮內免疫法所需的抗原量少，在抗原寶貴時特別適用，但與之相對的，它產生的抗體量也不多。混合免疫法的優點是抗原用量小，產生抗體速度快。②多克隆
單克隆抗體上清制備實驗——大量制備
實驗材料目的雜交瘤試劑、試劑盒完全 DMEM-10 培養液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）儀器、耗材250 ml 無菌錐形離心管轉瓶培養裝置850 cm2 旋轉培養瓶175 cm2 組織培養瓶實驗步驟1. 重復基本方案 1 步驟 1，并按 1:10 分傳到終體積為 1
關于多克隆抗體的抗體制備介紹
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟： 1、制備抗原。 2、選擇實驗動物。 3、動物免疫。 4、試取血進行測試，看看是否成功免疫。 5、如果成功免疫，殺死實驗動物，采集全部血清。 6、純化出抗體。 7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。 具體操作與制備原理參見中國免疫學實驗網。 （
【卡梅德生物】兔多抗制備|兔多克隆抗體制備|兔抗體
? 多克隆抗體是指由多種免疫細胞產生的針對特定抗原的抗體群體。與單克隆抗體相比，多克隆抗體可以識別抗原的多個表位，因此在某些應用中更為有效。兔是制備多克隆抗體的常用動物模型，因其體型適中、免疫反應良好且抗體產量高。? 兔多抗（Polyclonal antibodies）是一種多克隆抗體，由多個B細胞
基因工程抗體的制備
抗體的化學修飾： 抗體Fc段用雙功能連接劑與熒光素，同位素，酶，發光化合物，稀土元素以及藥物，毒素等連接后，并不影響其Fab功能區與特異性抗原結合。根據交聯物的性質不同，標記的抗體可用作診斷試劑，也可作為藥物的定向載體，引導藥物或毒素到達抗原存在部位使藥物或使毒素發揮更有效的作用，即俗稱“生物
單克隆抗體的制備
實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加
多克隆抗體的制備方法
一、器材?剪刀（剪兔毛用）一把、彎頭眼科手術鑷子（游離血管用）一把、直頭眼科手術剪（剪血管用）一把，手術刀架，手術刀片，注射器（1ml、 10ml，25ml）附針頭，兔子固定架，滅菌三角燒瓶（200ml）或平皿（直徑18cm）、彎頭止血鉗四把，直頭止血鉗兩把，手術縫合線，塑料放血管，紗布等
多克隆抗體的制備步驟
實驗試劑生理鹽水（或PBS）弗氏完全佐劑（Freund’s complete adjuvant，FCA）弗氏不完全佐劑（Freund’s incomplete adjuvant， FIA）二甲苯，酒精棉，脫脂棉，2% NaN3實驗設備剪刀（剪兔毛用）一把、彎頭眼科手術鑷子（游離血管用）一把、直頭眼科
抗肽抗體的制備實驗
提高免疫原性肽的抗血清，是最簡單的方法，獲得非隔離的蛋白質的抗體，例如，對來自DNA序列信息的推定蛋白質序列。 這種方法也是有用的，當隔離的抗原是困難或費時，或當抗原是一個大的蛋白家族的成員。實驗步驟： ?將10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉
單克隆抗體制備
1. 免疫動物：三只Balb/c小鼠?2. 佐劑：首先用完全弗氏佐劑（CFA），后用不完全弗氏佐劑（IFA）。?3. 免疫原：蛋白或KLH偶聯多肽。每次免疫使用50-100μg免疫原。?4. 免疫：用PBS稀釋免疫原，然后與相應的佐劑1：1混合。抗原和佐劑完全混合形成穩定的乳劑，將該乳劑在小鼠雙
抗體的制備方法與原理
一、抗血清的制備 有了質量好的抗原，還必須選擇適當的免疫途徑，才能產生質量好（特異性強和效價高）的抗體。 （一）用于免疫的動物 作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量，如
單克隆抗體的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩
基因工程抗體的制備
抗體Fc段用雙功能連接劑與熒光素，同位素，酶，發光化合物，稀土元素以及藥物，毒素等連接后，并不影響其Fab功能區與特異性抗原結合。根據交聯物的性質不同，標記的抗體可用作診斷試劑，也可作為藥物的定向載體，引導藥物或毒素到達抗原存在部位使藥物或使毒素發揮更有效的作用，即俗稱“生物導彈”。從而減少藥物
多克隆抗體的制備步驟
實驗概要本實驗通過兔免疫制備了多克隆抗體。主要試劑生理鹽水（或PBS）弗氏完全佐劑（Freund’s complete adjuvant，FCA）弗氏不完全佐劑（Freund’s incomplete adjuvant， FIA）二甲苯，酒精棉，脫脂棉，2% NaN3主要設備剪刀（剪兔毛用）一把、彎
多克隆抗體的制備步驟
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟：1、制備抗原。2、選擇實驗動物。3、動物免疫。4、試取血進行測試，看看是否成功免疫。5、如果成功免疫，殺死實驗動物，采集全部血清。6、純化出抗體。7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。具體操作與制備原理參見中國免疫學實驗網。（一）抗原制備Ig 是免疫球蛋白，對異種動
抗體酶的制備方法
1、雜交瘤技術經體內免疫后再進行細胞融合是制備抗體酶的一種傳統方法。雜交瘤技術的基本原理是用不能在培養液中生長的但能產生抗體的脾臟細胞，與能在培養液中生長的骨髓瘤細胞進行融合，融合得到的雜交細胞既能產生抗體又能在體外培養，通過選擇培養，以獲取能產生單克隆抗體的雜交瘤細胞。再把這些細胞單克隆化，即繁殖
熒光抗體(fluorescent－antibody)的制備
一、熒光素與抗體結合?1、透析法?（1）概述：適用于蛋白質含量低、樣品體積小的抗體溶液的標記。標記較均勻，非特異熒光較低。?（2）步驟：將含10mg/ml的Ig溶液10ml裝入透析袋，將上述透析袋放入燒杯中，含0.1mg/ml FITC的pH9.4的碳酸鹽緩沖液100ml；4℃磁力攪拌24h，取出透
單克隆抗體的制備
實驗方法原理使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加以擴增、冷凍和
抗原抗體反應的人單克隆抗體的制備
小鼠的單克隆抗體蛋白應用于人體后，作為抗原能引起人的免疫應答，大大降低其生物活性，并可能導致變態反應。因此人源單克隆抗體在臨床治療上有廣泛應用前景，引起人們的普遍興趣。但是人單克隆抗體制備存在許多技術上和倫理上的障礙，如人雜交瘤細胞系不穩定，有些抗原不能對人進行人工免疫，人B細胞只能從外周血中分
卵黃抗體制備的結果判定
對獲得的卵黃抗體進行的效價及活性測定，可采用免疫電泳實驗、瓊脂免疫擴散實驗、血凝抑制實驗、酶聯免疫吸附實驗等多種抗體檢測方法。
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物選擇免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處
卵黃抗體制備的實驗材料
1.健康產蛋雞（最好是SPF雞）、免疫抗原（如雞新城疫滅活疫苗）、弗氏佐劑。?2.滅菌生理鹽水或0.01mol/L pH7.2 PBS、海藻酸鈉、飽和硫酸銨等。?3.毛細滴管、注射器、碘酊棉、酒精棉、燒杯、玻璃棒、離心管、pH試紙等。?4.微量振蕩器、離心機、分光光度計等。
OsCCT1b抗體的制備
實驗概要本實驗構建了含OsCCTlb的原核表達載體，獲陽性克隆。誘導表達純化后免疫兔子，制備了OsCCT1b抗體。實驗步驟1. 載體構建將高保真PCR擴增的OsCRYlb基因的C末端OsCCTlb克隆到pET-21a( )載體中，得到的陽性克隆轉化如大腸桿菌E. coli BL21 (DE3)。2.