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無細胞蛋白表達技術是指用含有蛋白合成必需的組分（核糖體，轉運RNA，氨酰合成酶，啟動/延伸/終止因子，三磷酸鳥苷，ATP，Mg2+和K+）的細胞裂解物在體外進行蛋白合成。與傳統的基于細菌或真核細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的總體產量。此外，無細胞蛋白表達系統更適用于激酶等毒性蛋白的表達、也可使用經過修飾的tRNA來進行標記，在某特定位點摻入非天然的氨基酸。同時，這些系統還可以用于高通量實驗。快速獲得目的蛋白，從數天縮短至幾小時選擇一個無細胞蛋白表達系統，最主要的幾點考慮因素包括細胞提取物或裂解物的來源、模板以及期望的蛋白產量，從而選擇適合實驗體系和下游應用的無細胞蛋白表達系統。（一）模板在使用插入片斷或載體進行真核細胞系統蛋白表達時，有以下幾個因素需要考慮：(i) ATG起始密碼子應該是位于轉錄起始位點下游的第一個ATG密碼子；(ii) 理想化而......閱讀全文
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具。需要使用表達系統來對其進行制備。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質。作者： 伯吉斯等,主譯：陳薇，本實驗來自「蛋白質純化指南」實驗步驟一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
實驗步驟 一、引言 選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或
五、哺 乳 動 物 細 胞以前通常認為哺乳動物表達方法是重組蛋白表達效率最低的方法。然 而 ，最近的研究進展已經極大地提高了哺乳動物細胞系的表達水平(詳 見 第 15章)。例如, 有報道稱利用穩定轉染的中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary,C H O )細胞，重組抗體的表
活體動物體內光學成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物發光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團（GFP、RFP, Cyt及dyes等）進
DNA倍體分析及細胞周期分析 在細胞周期內,DNA含量隨細胞內時相發生周期性變化,正常情況下,大多數細胞處于休止期(Go), G1期細胞雖有DNA合成，但DNA含量仍為2N，為二倍體細胞,；處于活躍的DNA合成期(S期)的細胞DNA含量為2N-4N；正經歷細胞分裂(G2/M期)的細胞
二、細胞凋亡的細胞化學測定細胞凋亡的細胞化學測定包括細胞表面（細胞膜）的結構和通透性改變的測定和細胞核DNA改變的測定。根據應用的范圍，又可分為細胞群休和單個細胞測定兩種，以下僅介紹其中幾種較為常用的方法。碘化丙啶（propidium iodide,PI）檢測早期死亡細胞膜通透性狀態的不同是區分細胞
Karl Deisseroth一次又一次地用他發明的新技術在腦科學(brain science)發展史上刻下了自己的大名。 Karl Deisseroth在2004年有了第一個完全屬于他的實驗室，后來他發現那間實驗室的前主人竟然是諾貝爾物理學獎得主朱棣文(Steven Chu)。“我搬
今天《自然藥物研發》雜志發表一篇耶魯大學Craig Crews教授撰寫的綜述，介紹雙特異小分子誘導的蛋白降解。這篇文章介紹了目前已知的蛋白降解技術，從無選擇性的熱休克蛋白抑制劑、到意外發現的AR、ER降解小分子、到機理未知的HyT、到Crews教授自己發明的利用連接酶降解的PROTACs技術。重
一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：網站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA 四、血小板
五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進，對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法，這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中，轉移質粒和親代桿狀病毒
細胞生物學研究中的一些常規操作只是整個項目中微不足道但又非常重要的一步。這些常規操作簡單沒有技術內涵，卻消耗了研究者大量時間與體力，且結果也不能得到保證。其中使用血球計數板在顯微鏡下進行手動細胞計數首當其沖。 手工計數不僅浪費了研究者大部分的時間，繁冗無聊的計數過程往往讓人頭暈眼花，影響了研究者的積
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
關于包涵體的純化是一個令人頭疼的問題，包涵體的復性已經成為生物制藥的瓶頸，關于包涵體的處理一般包括這么幾步：菌體的破碎、包涵體的洗滌、溶解、復性以及純化，內容比較龐雜 一、菌體的裂解 1、怎樣裂解細菌？ 細胞的破碎方法 1.高速組織搗碎
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
來自印度開羅大學的 Don G. Morris 教授等在 Frontieirs in oncology 上近期發表的一篇綜述，系統地概括了目前在肺癌免疫治療領域的進展，以及近期一系列臨床試驗進行的現狀。 摘要 關于炎癥 / 感染 / 免疫激活與腫瘤患者預后的相關性，許多研究都從原因和結果的不
流式細胞儀實驗方法 一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．C
圖1. E-plate底部的交叉微電極工作原理示意圖。貼壁生長的哺乳動物細胞與微電極間的相互作用產生的阻抗與孔內的細胞數量、細胞形態以及細胞黏附質量相關；阻抗的大小用細胞指數（CI）進行衡量。生物學和細胞進程是動態變化的，而目前的細胞檢測方法多采用傳統的終點法，需要標記，并且
一、 疫苗的概念及分類 疫苗，是指一切通過注射或黏膜途徑接種，可以誘導機體產生針對特定致病原的特異性抗體或細胞免疫，從而使機體獲得保護或消滅該致病原的生物制品，包括蛋白質、多糖、核酸活載體，感染因子等。在我國，疫苗分為一類疫苗和二類疫苗。 一類疫苗，是指政府免費向公民提供，公民應當依照政府的
分析測試百科網訊 2018年11月24日-26日，2018年中國質譜學術大會在廣州東方賓館盛大召開。本次大會包括一個報告主論壇，21個主題分論壇，共300余場演講報告。在“生命科學與醫學”分論壇上，數十位業內專家學者帶來精彩的演講報告，吸引參會人員駐足聆聽。分析測試百科網作為本次活動的合作媒體，
第二部分 細胞因子 細胞內細胞因子的流式細胞儀檢測 一、簡介隨著研究的進展，僅僅對細胞進行定量和活性的檢測已不能滿足需要。在單細胞水平研究細胞因子的表達能力對研究細胞因子在疾病中的作用越來越顯的重要無比。目前檢測單個細胞特定細胞因子的表達手段包括：ELIspot、原位雜交、免疫細胞化學、限制
分析測試百科網訊 2018年9月25日，首屆微納流細胞分析學術報告會在北京召開，百余位業內專家學者參與了此次報告會。本次大會為期兩天，同期在清華大學化學系舉辦“第5期微流控芯片質譜聯用細胞分析講習會”。會議圍繞著微流控及細胞研究領域的最新研究成果進行交流與探討，關注微流控細胞分析基礎研究與應用開
BioTechniques雜志日前評出了2015年最受歡迎的十篇技術文章，涵蓋了對PCR、DNA提取、無細胞蛋白表達等常規技術的改良，以及CRISPR/Cas9、Hi-Plex、微圖案化等新技術的應用。 1. Visual detection of isothermal nucleic aci
慢病毒，（ Lentivirus ）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷 I 型病毒）為基礎發展起來的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發展得很快，研究的也非常深入。慢病毒載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達
慢病毒，（ Lentivirus ）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷 I 型病毒）為基礎發展起來的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發展得很快，研究的也非常深入。慢病毒載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達
慢病毒，（ Lentivirus ）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷 I 型病毒）為基礎發展起來的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發展得很快，研究的也非常深入。慢病毒載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達
癌癥免疫療法是一種針對人體免疫系統而非直接針對腫瘤的療法，其已有30多年歷史，它治療的是人體免疫系統而非直接針對腫瘤。醞釀了數十年的癌癥免疫療法終于確定了它的潛力，在臨床試驗中表現出令人鼓舞的效果。 【1】默沙東免疫療法Keytruda黑色素瘤一線治療擊敗百時美Yervoy
分析測試百科網訊 2018年9月22日，由中國生物化學與分子生物學會糖復合物專業委員會主辦，復旦大學承辦的2018年全國糖生物學會議在上海舉行。本次會議邀請了國內糖化學及糖生物學研究領域知名的專家和學者，介紹糖化學生物學合成、糖生物學、糖藥物、糖組學、糖鏈結構分析、糖生物工程與技術等糖相關領域的
目前檢測單個細胞特定細胞因子的表達手段包括：ELIspot、原位雜交、免疫細胞化學、限制性稀釋分析（limiting dilution analysis，LDA）和單細胞PCR，應用原位雜交技術和免疫組化方法觀察細胞因子蛋白表達及mRNA表達可以識別Th1和Th2細胞，此方法可獲得較強的細胞