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生物細胞產生的酶有兩類：一類由細胞內產生后分泌到細胞外進行作用的酶，稱為細胞外酶。這類酶大都是水解酶，如酶法生產葡萄糖所用的兩種淀粉酶，就是由枯草桿菌和根酶發酵過程中分泌的。這類酶一般含量較高，容易得到；另一類酶在細胞內產生后并不分泌到細胞外，而在細胞內起催化作用，稱為細胞內酶，如檸檬酸、肌苷酸、味精的發酵生產所進行的一系列化學反應，就是在多種酶催化下在細胞內進行的，在類酶在細胞內往往與細胞結構結合，有一定的分布區域，催化的反應具有一定的順序性，使許多反應能有條不紊地進行。酶的來源多為生物細胞。生物細胞內產生的總的酶量雖然是很高的，但每一種酶的含量卻很低，如胰臟中期消化作用的水解酶種類很多，但各種酶的含量卻差別很大。因此，在提取某一種酶時，首先應當根據需要，選擇含此酶最豐富的材料，如胰臟是提取胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、淀粉酶和脂酶的好材料。由于從動物內臟或植物果實中提取酶制劑受到原料的限制，如不能綜合利用，成本又很大。目前工業上大......閱讀全文
經富集培養以后的樣品,目的微生物得到增殖,占了優勢,其他種類的微生物在數量上相對減少,但并未死亡.富集后的培養液中仍然有多種微生物混雜在一起,即使占了優勢的一類微生物中,也并非純種.例如同樣一群以油脂為碳源的脂肪酶產生菌,有的是細菌,有的是霉菌,有的是芽孢桿菌,有的不產芽孢,有的生產能力強,有的生產
經富集培養以后的樣品,目的微生物得到增殖,占了優勢,其他種類的微生物在數量上相對減少,但并未死亡.富集后的培養液中仍然有多種微生物混雜在一起,即使占了優勢的一類微生物中,也并非純種.例如同樣一群以油脂為碳源的脂肪酶產生菌,有的是細菌,有的是霉菌,有的是芽孢桿菌,有的不產芽孢,有的生產能力強,有的生產
實驗方法原理常規聚丙烯酰胺凝膠電泳后的檢測，對于不同的目的，應采用不同的檢測方法。由于這種電泳方法不破壞蛋白質的生物活性，所以可選用的檢測方法很多。試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液Tris-甘氨酸緩沖液貯液電極緩沖液樣品緩沖液過硫醆銨濃縮膠緩沖液貯液分離膠緩沖液貯液實驗步驟一、早期染色方法用染料和生物大
第三節 微生物的分離經富集培養以后的樣品，目的微生物得到增殖，占了優勢，其他種類的微生物在數量上相對減少，但并未死亡。富集后的培養液中仍然有多種微生物混雜在一起，即使占了優勢的一類微生物中，也并非純種。例如同樣一群以油脂為碳源的脂肪酶產生菌，有的是細菌，有的是霉菌，有的是芽孢
第三節 微生物的分離經富集培養以后的樣品，目的微生物得到增殖，占了優勢，其他種類的微生物在數量上相對減少，但并未死亡。富集后的培養液中仍然有多種微生物混雜在一起，即使占了優勢的一類微生物中，也并非純種。例如同樣一群以油脂為碳源的脂肪酶產生菌，有的是細菌，有的是霉菌，有的是芽孢
淺述蛋白質分離純化的新技術摘 要： 本文主要介紹了濁點萃取法、置換色譜法、親和層析法、親和色譜法、凝膠電泳、雙水相萃取等蛋白質的最新分離純化技術，綜和近年來國內外的一些研究結果，結合實際應用的例子，分析了各種分離純化方法的優點，同時指出其不足之處。文章最后展望了蛋白質分離純化技術的發展趨勢。&nbs
表2－1 室溫下由S1提高到S2時每升加固體硫酸銨的克數 0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242
實驗材料鏈霉親和素-過氧化物酶 &
酶的分離純化方法簡介生物細胞產生的酶有兩類：一類由細胞內產生后分泌到細胞外進行作用的酶，稱為細胞外酶。這類酶大都是水解酶，如酶法生產葡萄糖所用的兩種淀粉酶，就是由枯草桿菌和根酶發酵過程中分泌的。這類酶一般含量較高，容易得到；另一類酶在細胞內產生后并不分泌到細胞外，而在細胞內起催化作用，稱為細胞內酶，
隨著生物制藥的快速發展及監管部門對生物藥的要求越來越高，使得生物制藥的分離純化難度越來越大。層析技術由于具有極高的分離純化效率且應用條件溫和，在分離純化過程中容易保持目標分子的生物活性，因此層析技術已成為生物制藥最重要的純化工具。層析介質制備技術難度大、門檻高，目前主要由美國GE、日本Tosoh
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單
所有形式的親和層析法都需要兩個組分間形成特異性相互作用，通過這種作用可以純化其中一種組分。免疫親和層析即利用抗原和抗體的特異性相互作用，是遵循親和層析原理的一個分類 [綜述見 Subramanian(2002)]。事實上，免疫親和層析是免疫沉淀程序規模放大的拓展應用，不同的部分在于, 層析后需要回收
實驗步驟 一、多羥基反應單克隆抗體 我們最先使用了一類特殊的單克隆抗體, 并將其用于免疫親和層析。這些抗體可以用于溫和的免疫親和層析, 因為洗脫條件只需要聯合使用無離液鹽和低分子質量的多羥基化合物 (多元醇），此條件下蛋白質呈非
離子交換劑的總交換容量通常以每毫克或每毫升交換劑含有可解離基團的毫克當量數（meq / mg或meq / ml）來表示。通常可以由滴定法測定。陽離子交換劑首先用HCl處理，使其平衡離子為H?。再用水洗至中性，對于強酸型離子交換劑，用NaCl充分置換出H?，再用標準濃度的NaOH滴定生成的HCl，
免疫酶細胞化學免疫酶細胞化學是免疫細胞化學（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗體特異反應存在的前提條件下，借助于酶細胞化學的手段，檢測某種物質（抗原/抗體）在組織細胞內存在部位的一門新技術：即預先將抗體與酶連結，再使其與組織內特異抗原反應，經細胞化學染色
1 分離方法 采取何種分離純化方法要由所提取的組織材料、所要提取物質的性質決定。對蛋白質、多肽提取分離常用的方法包括：鹽析法、超濾法、凝膠過濾法、等電點沉淀法、離子交換層析、親和層析、吸附層析、逆流分溶、酶解法等。這些方法常常組合到一起對特定的物質進行分離純化，同時上述這些方法也是蛋白
摘 要 綜述了近幾年來多肽類物質的提取分離與分析方法，主要包括高效液相色譜法、電泳、質譜及核磁共振等方法在肽類物質研究中的最新應用進展。 多肽類化合物廣泛存在于自然界中，其中對具有一定生物學活性的多肽的研究，一直是藥物開發的一個主要方向。生物體內已知的活性多肽主要是從內分泌腺組織器官、分泌細
摘 要 綜述了近幾年來多肽類物質的提取分離與分析方法，主要包括高效液相色法、電泳、質譜及核磁共振等方法在肽類物質研究中的最新應用進展。 多肽類化合物廣泛存在于自然界中，其中對具有一定生物活性的多肽的研究，一直是藥物開發的一個主要方向。生物體內已知的活性多肽主要是從內分泌腺組織器官、分泌細胞和體
應用末端截切、進化、再延長技術提高酶穩定性的方法 實驗材料 質粒
實驗方法原理 在核內，RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonuc
2．核酸的分離純化 從細胞中提取核酸后，仍混雜著蛋白質、多糖和各種大小分子核酸同類物。除去這些“雜質”的過程，也就是核酸提純過程。在核酸的分離純化時，為防止核酸大分子的變性降解，必須在0～4℃的低溫條件下操作。核酸酶的水解作用，是過去制備具有活性核酸大分子的嚴重障礙，現普遍采用加入去污劑或加入E
ELISA原理 ELISA利用抗原抗體之間專一性結合之特性，對標本進行檢測；由于結合與固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設計 其結合 機制後，配合酵素顯色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進行定量分析。根據待測樣品與結合機制的不同，ELI
（二）乳過氧化物酶法（LPO） 本法反應溫和，對抗原、抗體免疫活性影響小，已被廣泛應用。缺點是標記率較低，一般為20～40%。 1．原理此法是利用乳過氧化物酶（Lactoperoxidase）有促進微量過氧化氫對125I-的氧化作用，生成125I+，并標記在多肽、蛋白質酪氨酸分子上。 2．方法
實驗方法原理 在核內，RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucUoprotein，hnRNP) 結合形成 hnRNP 復合物。實驗材料 HeLa S3 細胞抗體試劑、試
2013年8月3日-4日，由中國儀器儀表學會分析儀器分會樣品制備專業委員主辦，中國科學院大連化學物理研究所協辦的“第一屆全國樣品制備學術報告會”在浪漫之都大連舉行。會議期間來自全國100余位專家、學者及廠商代表共聚一堂，交流、切磋樣品前處理技術的科研進展。分析測試百科網作為受邀媒體對大會進行了全
1、核酸抽提原理 簡單地講，核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。裂解是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過程，純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分，如蛋白質、鹽及其它雜質徹底分離的過程。 經典的裂解液幾乎都含有去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等
摘要 本文對植物的原生質體融合技術得研究進展進行了綜述。闡述原生質體制備、培養方面的研究進展，隨后介紹了原生質體融合方法、融合機理和融合方式等的研究進展，最后對其今后的應用前景進行了展望，為原生質體融合技術的發展提供了參考。 關鍵詞 原生質體 融合技術 研究進展 01 — 原生質體制
在核內，RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucUoprotein，hnRNP) 結合形成 hnRNP 復合物。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
從細胞中提取核酸后，仍混雜著蛋白質、多糖和各種大小分子核酸同類物。除去這些“雜質”的過程，也就是核酸提純過程。在核酸的分離純化時，為防止核酸大分子的變性降解，必須在0～4℃的低溫條件下操作。核酸酶的水解作用，是過去制備具有活性核酸大分子的嚴重障礙，現普遍采用加入去污劑或加入EDTA、8-羥基喹啉、檸