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外源基因在原核細胞中表達是基因工程操作中最初取得成功的途徑。1 原核生物基因表達的特點同所有的生命過程一樣，外源基因在原核細胞中的表達包括兩個主要過程:即 DNA轉錄成mRNA和 mRNA翻譯成蛋白質。與真核細胞相比，原核細胞的表達有以下特點:①原核生物只有一種RNA 聚合酶(真核細胞有三種)識別原核細胞的啟動子，催化所有 RNA的合成。②原核生物的表達是以操縱子為單位的。操縱子是數個相關的結構基因及其調控區的結合，是一個基因表達的協同單位。調控區主要分為三個部分:操縱基因(operator)、啟動子(promotor)及其他有調控功能的部位。③由于原核生物無核膜，所以轉錄與翻譯是偶聯的，也是連續進行的。原核生物染色體 DNA是裸露的環形 DNA，轉錄成 mRNA 后，可直接在胞漿中與核糖體結合翻譯形成蛋白質。在翻譯過程中，mRNA可與一定數目的核糖體結合形成多核糖體(Polyribosome)。兩個核糖體之間有一定長度的間......閱讀全文
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
第七節 實驗動物的處死當實驗中途停止或結束時，實驗者應站在實驗動物的立場上以人道的原則去處置動物，原則上不給實驗動物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安樂死。安樂死是指實驗動物在沒有痛苦感覺的情況下死去。實驗動物安樂死方法的選擇取決于動物的種類與研究的課題。一、蛙 類常用金屬探針插入枕骨大孔,破壞腦脊髓的
三、實驗動物的準備本文主要敘述制備轉基因鼠的實驗程序。(一)不育雄性公鼠:結扎公鼠與母鼠交配以后產生假孕母鼠。受結扎的公鼠需8周以上，對種系無特殊要求。在正式實驗前，結扎公鼠需與性成熟的雌性小鼠交配，反復交配兩次或三次，經檢查雌體有陰道栓，但均不懷孕產仔，則證明結扎成功。結扎公鼠使母鼠產生陰道栓的能
自從人類學會蓄養動物、耕作植物以來，我們的祖先就從未停止過對物種的遺傳改良。過去的幾千年里改良物種的主要方式：針對自然環境造成的突變或無意的人為因素所產生的優良基因和重組個體進行選育和利用，從而通過隨機和自然的積累優化基因。然而這種極低幾率且無人類控制性的被動模式大大阻礙了農業的發展，迫切地需要
自從人類學會蓄養動物、耕作植物以來，我們的祖先就從未停止過對物種的遺傳改良。過去的幾千年里改良物種的主要方式：針對自然環境造成的突變或無意的人為因素所產生的優良基因和重組個體進行選育和利用，從而通過隨機和自然的積累優化基因。然而這種極低幾率且無人類控制性的被動模式大大阻礙了農業的發展，迫切地需要
1.轉基因技術的發展 自從人類學會蓄養動物、耕作植物以來，我們的祖先就從未停止過對物種的遺傳改良。過去的幾千年里改良物種的主要方式：針對自然環境造成的突變或無意的人為因素所產生的優良基因和重組個體進行選育和利用，從而通過隨機和自然的積累優化基因。然而這種極低幾
蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。 1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性
蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同，適合表
（6）遺傳標記： 從成千上萬個哺乳細胞中，檢測出極少數的含DNA重組體的轉染細胞，并鑒定已導入外源DNA是哺乳動物細胞基因表達系統的一個關鍵內容。因此，在真核生物表達載體上必須附有標記基因，才能進行篩選。常用的標記基因有：胸苷激酶基因（thymidine kinase，TK）、二氫葉酸還原酶
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
CHO細胞無血清培養入門技術手冊——深圳百恩維生物1、CHO細胞背景CHO細胞是中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)，1957年美國科羅拉多大學Dr. Theodore T. Puck從一成年雌性倉鼠卵巢分離獲得，為
基因載體是基因工程的核心，也是基因治療中強有力的生物工具，我們先來認識和閱讀載體圖譜吧。 一、載體分類及載體組成元件 載體分類 1、按屬性分類：病毒載體和非病毒載體 病毒載體是一種常見的分子生物學工具，可將遺傳物質帶入細胞，原理是利用病毒具有傳送其基因組進入目的細
基因載體是基因工程的核心，也是基因治療中強有力的生物工具，我們先來認識和閱讀載體圖譜吧。 一、載體分類及載體組成元件 載體分類 1、按屬性分類：病毒載體和非病毒載體 病毒載體是一種常見的分子生物學工具，可將遺傳物質帶入細胞，原理是利用病毒具有傳送其基因組進入目
PCR引物決定PCR的特異性，引物的設計就顯得尤為重要。下面以已知DNA序列設計引物為例介紹設計引物應考慮的幾個方面：1、GC比值：眾所周知,堿基對中的GC之間有三條氫鍵，AT之間有兩條氫鍵，GC和AT在引物序列中的合理比例是設定PCR中退火溫度的重要依據。通常在一個引物中GC和AT各半即可。2、長
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
（1）CaCl2處理以后的轉化: 當細菌處于0℃、二價陽離子（如Ca2+、Mg2+等）低滲溶液中時，細菌細胞膨脹成球形，處于感受態；此時轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，重組DNA在42℃短時間熱沖擊后吸附在細胞表面，在豐富培養基中生長數小時后，球狀細胞恢復原
二、目的基因和載體的連接獲得目的基因后必須將其放在一定的載體內才能在宿主細胞內擴增或表達。目的基因與載體的連接及其后續的轉化過程習慣上稱為克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技術獲得，因此這里先介紹PCR產物的克隆策略，然后再介紹其他的克隆方式。（一）PCR產物的克隆策略獲得PCR
通過外源DNA的重組、克隆、以及鑒定，可以獲得所需的特異DNA克隆。外源克隆基因在某種表達載體及適宜的宿主細胞中可表達為相應的蛋白質，這就組成了外源基因的蛋白表達系統。表達后的蛋白質必須具有原來的生物學活性，這是基于正確的基因轉錄、轉錄后加工、mRNA翻譯及翻譯后修飾，同時與表達載體的結構和表達體系
（3）插入表達篩選法與插入失活相反，插入表達法是外源目的基因插入特定載體后，能激活用于篩選操作的標記基因的表達，由此進行轉化子的篩選。設計載體時，在篩選標記基因前面連接一段具有抑制作用的負調控序列，插入外源DNA將使該負調控序列失活，其下游的篩選標記基因才能表達。例如質粒pTR262有一個負調控的c
基因載體是基因工程的核心，也是基因治療中強有力的生物工具，我們先來認識和閱讀載體圖譜吧。 載體分類及載體組成元件 載體分類 1、按屬性分類：病毒載體和非病毒載體 病毒載體是一種常見的分子生物學工具，可將遺傳物質帶入細胞，原理是利用病毒具有傳送其基因組進入目的細胞，進行感染的分子機制。
1. 真核生物表達的優越性和必要性① 真核生物具有轉錄后加工系統，可識別并刪除基因中的內含子，剪切加工為成熟mRNA.②具備完善的翻譯后加工系統，可進行糖基化、乙酰化等修飾，使蛋白形成正確的天然構型，因而真核生物表達系統產生的蛋白更接近天然狀態，有利于其功能、生物活性的研究。③某些真核細胞可將基因表
自天然耐受現象的發現，克隆選擇學說的提出為免疫生物學的發展奠定了理論基礎，使現代免疫學的發展方向發生了重大變化。使免疫學從抗感染免疫的概念中解脫出來，進而發展為生物機體對“自己”和“非己”的識別，藉以維持機體穩定性的生物學概念。這一發展時期自60年代迄今發現了胸腺的免疫功能，確認了淋巴
大腸桿菌表達系統最突出的優點是工藝簡單、產量高、周期短、生產成本低。然而，許多蛋白質在翻譯后，需經過翻譯后的修飾加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等過程才能轉化成活性形式。大腸桿菌缺少上述加工機制，不適合用于表達結構復雜的蛋白質。另外，蛋白質的活性還依賴于形成正確的二硫鍵并折疊成高級結構，在
名稱：轉基因小鼠模型的建立(SOP)關鍵詞：轉基因小鼠目的：在動物體研究轉化基因原理：轉基因動物是指染色體基因組中整合有外源基因并能遺傳給后代的一類動物。整合到動物染色體基因組的外源基因稱為轉基因。轉基因技術則是指制備轉基因動物所需的一套技術，它涉及外源基因的構建、載體和受體的篩選、基因導人技術、供
2.包涵體的分離與純化細胞破碎時提取細胞內產物的關鍵。對于細菌的裂解常用的有酶溶法、超聲破碎法、化學滲透法、玻璃珠研磨等。包涵體可通過超聲波、勻漿等常規的方法是菌體破碎后，離心就可得到。密度梯度離心后可得到高純度的包涵體。包涵體一般不溶于水，為了獲得可溶性的蛋白質可加入強蛋白質變性劑后使其溶解。一般
第七節 實驗動物的處死當實驗中途停止或結束時，實驗者應站在實驗動物的立場上以人道的原則去處置動物，原則上不給實驗動物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安樂死。安樂死是指實驗動物在沒有痛苦感覺的情況下死去。實驗動物安樂死方法的選擇取決于動物的種類與研究的課題。一、蛙 類常用金屬探針插入枕骨大孔,破壞腦脊髓的
載體主要有病毒和非病毒兩大類,其中質粒DNA是一種新的非病毒轉基因載體。一、一個合格質粒的組成要素? 復制起始位點Ori 即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起始點。而真核生物DNA分子有多個復制起始位點。? 抗生素抗性基因 可以便于加以
載體主要有病毒和非病毒兩大類,其中質粒DNA是一種新的非病毒轉基因載體。一、一個合格質粒的組成要素? 復制起始位點Ori 即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起始點。而真核生物DNA分子有多個復制起始位點。? 抗生素抗性基因 可以便于加以
載體主要有病毒和非病毒兩大類,其中質粒DNA是一種新的非病毒轉基因載體。一、一個合格質粒的組成要素? 復制起始位點Ori 即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起始點。而真核生物DNA分子有多個復制起始位點。? 抗生素抗性基因 可以便于加以
在作為載體時，這些噬菌體有一個很大的優點，即克隆到M13mp載體的外源DNA片段（雙鏈），在子代噬菌體便成為了單鏈形式。故應用M13mp進行克隆，可方便地分離到大量含有外源DNA某一單鏈的DNA分子。這種單鏈DNA可在下列工作中作模板：①主要用作雙脫氧鏈終止法進行DNA序列測定的模板；②制備僅有一條