酶免疫技術酶與底物
酶結合物是酶與抗原或者抗體、半抗原在交聯劑作用下聯結的產物,是 ELISA 成敗的關鍵試劑。它不僅具有抗原抗體的特異性反應,還具有酶促反應的特性,最終產生生物放大的特性。酶免疫反應中,最常用的酶是辣根過氧化物酶,HRP的催化反應需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染料,通過反應可生成有色的氧化型染料(D)。酶促反應的過程如下:供氫體的種類很多,形成的產物特點不一。如 DAB(3,3-二氨基聯苯胺)的反應產物為不溶性沉淀物,并有電子密度,故適宜做免疫酶染色或電鏡觀察。5-氨基水楊酸(5-AS)早期曾用于 ELISA,但其溶解度不夠大,且空白孔不易控制到無色,現已很少應用。鄰聯甲苯胺(OT)的特點是能產生鮮艷的藍綠色產物且靈敏度較高,但反應中受溫度的影響較大,而且由于產物不穩定,需要在短時間內進行測定。HRP 最常用的色原底物(供氫體)有鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯苯胺(TMB)以及4-氨基安替比林......閱讀全文
酶免疫技術酶與底物
酶結合物是酶與抗原或者抗體、半抗原在交聯劑作用下聯結的產物,是 ELISA 成敗的關鍵試劑。它不僅具有抗原抗體的特異性反應,還具有酶促反應的特性,最終產生生物放大的特性。酶免疫反應中,最常用的酶是辣根過氧化物酶,HRP的催化反應需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染
酶免疫技術中酶和酶作用底物
酶和酶作用底物（一）酶的要求：?一個酶蛋白分子每分鐘可催化10 3 ～10 4 個底物分子轉變成有色產物。用于標記的酶應符合：1.酶的活性要強，催化反應的轉化率高，純度高。2.酶催化底物后產生的產物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復性好。3.作用專一性強 ，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢
免疫酶技術中常用的酶底物系統
各種免疫酶技術,最終都是以某種顯色反應而揭示待測物質來進行定性和定量分析。不同酶要選擇相應的底物,見下表。免疫酶技術中常用的酶-底物系統酶底物顯色反應測定波長/nm辣根過氧化物酶二氨基聯苯胺深褐色沉淀5-氨基水楊酸棕色449鄰苯二胺橘紅色492/460鄰聯甲苯胺藍色4254-硝基酚磷酸黃色400堿性
酶免疫技術中酶和酶作用底物是怎么樣的呢？
酶和酶作用底物 （一）酶的要求： 一個酶蛋白分子每分鐘可催化10 3 ～10 4 個底物分子轉變成有色產物。用于標記的酶應符合： 1.酶的活性要強，催化反應的轉化率高，純度高。 2.酶催化底物后產生的產物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復性好。 3.作用專一性強 ，酶活性不受樣品
酶免疫技術常用的底物知識點小結
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種： （1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩定性差，易
酶免疫技術常用的底物知識點小結
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種：（1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩定性差，易變色，需新
酶免疫技術常用的底物知識點小結
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種： （1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩定性差，易
用于酶聯免疫測定（ELISA）酶的色原底物
辣根過氧化物酶的色原底物 HRP最常用的色原底物有鄰苯二胺(OPD)、2，2’—吖嗪—(3—乙酰苯基噻唑磺酸—6)[2，2’—azino-di(3—ethylben2thiazolinesulphonicacid-6)，ABTS](雜環吖嗪)、四甲基聯苯胺(TMB)和4—氨基安替比林：苯酚耦聯底
免疫酶標技術
實驗方法原理 先將酶與抗體結合形成酶標抗體，然后和相應的抗原反應，使抗原抗體復合物上帶有酶分子，再與酶的底物H2O2—DAB（3’3—二胺荃聯苯胺）發生顯色反應，在顯微鏡下觀察，根據顏色產物檢測相應抗原。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBSH2O2血清儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. ?標本固定；2.
免疫酶標技術
免疫酶標技術1）??直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％?H2O2（或1％?H2O2?甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘
酶免疫電鏡技術
（一）??原理?酶免疫電鏡技術是利用酶的高效率的催化作用對其底物的反應形成不同的電子密度，借助于電子顯微鏡觀察，證明酶的存在，從而對抗原進行定位。（二）材料與試劑1．PBS液? 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。2．DAB溶液? 取5m
免疫酶技術介紹
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在，以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷
酶免疫技術分類
酶免疫技術一般分成酶免疫組化技術和酶免疫測定兩大類。酶免疫組化技術與熒光抗體技術相似，酶標記抗體與組織切片上的抗原起反應，然后與酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光學顯微鏡下觀察。如酶作用的產物電子密度發生一定的改變，則可用電子顯微鏡觀察，稱為酶免疫電鏡技術。 酶免疫測定根據抗原抗體反應后
免疫酶技術介紹
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在，以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷
免疫酶標技術
中文名稱免疫酶標技術英文名稱immunoenzymatic technique定 義以酶標記抗體（或抗原），通過相應底物被酶解后的顯色反應，對細胞和組織標本中的抗原-抗體復合體進行定位、定性分析和鑒定的方法。也可根據酶催化底物顯色的深淺程度，定量測定體液標本中待測抗原或抗體的含量。應用學科細胞生物
免疫酶標技術
1） 直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色
酶聯免疫技術與酶標儀的發展
（一）試劑微量化由于樣品檢測過程中有時需要對僅有的少量樣品進行檢測，而且由于檢測樣本數量大，因而要求進行微量檢測，從而能夠達到節約樣品、試劑的目的。進行微量檢測對于儀器的靈敏度的要求大大提高，因此一些更加靈敏的檢測方法和新技術就被運用到酶標儀中，從而提高丁儀器的靈敏度，克服了檢測過程中樣品、試劑有限
酶聯免疫技術與酶標儀的發展
(一)試劑微量化?? 由于樣品檢測過程中有時需要對僅有的少量樣品進行檢測，而且由于檢測樣本數量大，因而要求進行微量檢測，從而能夠達到節約樣品、試劑的目的。進行微量檢測對于儀器的靈敏度的要求大大提高，因此一些更加靈敏的檢測方法和新技術就被運用到酶標儀中，從而提高丁儀器的靈敏度，克服了檢測過程中樣品、試
酶聯免疫技術與酶標儀的發展
(一)試劑微量化?? 由于樣品檢測過程中有時需要對僅有的少量樣品進行檢測，而且由于檢測樣本數量大，因而要求進行微量檢測，從而能夠達到節約樣品、試劑的目的。進行微量檢測對于儀器的靈敏度的要求大大提高，因此一些更加靈敏的檢測方法和新技術就被運用到酶標儀中，從而提高丁儀器的靈敏度，克服了檢測過程中樣品、試
酶聯免疫技術與酶標儀的發展
（一）試劑微量化由于樣品檢測過程中有時需要對僅有的少量樣品進行檢測，而且由于檢測樣本數量大，因而要求進行微量檢測，從而能夠達到節約樣品、試劑的目的。進行微量檢測對于儀器的靈敏度的要求大大提高，因此一些更加靈敏的檢測方法和新技術就被運用到酶標儀中，從而提高丁儀器的靈敏度，克服了檢測過程中樣品、試劑有限
酶免疫技術抗體的酶標記方法
用于酶免疫技術的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產物易于顯現;能商品化生產。目前酶免疫技術檢測中常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋果酸脫氫酶等。由于辣根過氧化
免疫酶技術的技術原理
免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物，與抗體或抗原聯結，與相應的抗原或抗體作用后，通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學技術。目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗
免疫酶技術的技術原理
免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物，與抗體或抗原聯結，與相應的抗原或抗體作用后，通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學技術。目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗
免疫酶技術的技術原理
免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物，與抗體或抗原聯結，與相應的抗原或抗體作用后，通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學技術。目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗
酶與底物反應產生產物的過程
S(底物)→P(產物)這個反應之所以能夠進行,是因為有相當部分的S分子已被激活成為活化(過渡態)分子,活化分子越多,反應速度越快。在特定溫度時,化學反應的活化能是使1摩爾物質的全部分子成為活化分子所需的能量(千卡)。酶(E)的作用是:與S暫時結合形成一個新化合物ES,ES的活化狀態(過渡態)比無催化
酶免疫分析技術進展與自動化
郝繁運?? 綜述?中國誤診學雜志? 2007年 第一期??第五次全國中青年檢驗醫學學術會議論文匯編?摘要：本文主要介紹了酶免疫分析的發展現狀，從酶免疫分析標記技術若干環節的技術進步、在方法學上與現代化技術的融合與發展、酶免疫分析技術在儀器自動化方面的進展與現狀以及酶免技術的局限等方面進行了論述，特別
酶免疫技術的介紹
酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑的方法，是標記免疫技術的一種。近年來標記免疫技術飛速發展，應用不同標記物，根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮，而方法的創建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型，對該方法的正確理解有著重要意義。本節先敘述各種標記免疫技
酶免疫技術的概述
酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑的方法，是標記免疫技術的一種。近年來標記免疫技術飛速發展，應用不同標記物，根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮，而方法的創建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型，對該方法的正確理解有著重要意義。本節先敘述各種標記免疫技
酶免疫技術的分類
酶免疫技術一般分成酶免疫組化技術和酶免疫測定兩大類。酶免疫組化技術與熒光抗體技術相似，酶標記抗體與組織切片上的抗原起反應，然后與酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光學顯微鏡下觀察。如酶作用的產物電子密度發生一定的改變，則可用電子顯微鏡觀察，稱為酶免疫電鏡技術。 酶免疫測定根據抗原抗體反應后
免疫酶技術應用介紹
免疫酶技術是指在一定的生物反應器內,利用酶的催化作用,進行物質轉化的技術.其應用范圍已遍及工業、醫藥、農業、化學分析、環境保護、能源開發和生命科學理論研究等各個方面。