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學習水平式瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的純度、構型、含量和分子量大小。實驗原理：閉合環狀質粒、線性質粒和開環質粒DNA由于構形不同，在加溴化乙錠的瓊脂糖凝膠電泳上呈現不同的遷移率，因而在紫外燈下觀察，能區別閉合環狀質粒DNA（cccDNA）、線性質粒DNA（L-DNA）和開環質粒DNA（ocDNA）。實驗材料和試劑（一）實驗樣品質粒pUC118（二）試劑1．l DNA/HindIII分子量標準2．溴酚藍指示劑點樣緩沖液 0.2% 溴酚藍 50% 蔗糖3．1mg/ml溴化乙錠溶液4．電泳緩沖液（TAE） 40 mmol/L Tris-乙酸 1 mol/......閱讀全文
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
電泳法，是指帶電荷的供試品（蛋白質、核苷酸等）在惰性支持介質（如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場的作用下，向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動，使組分分離成狹窄的區帶，用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其百分含量的方法。 電泳技術的
【摘要】 目的建立抗草甘膦轉基因大豆的快速檢測方法。方法：針對轉基因大豆基因組中被導入的35S啟動子、NOS終止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因，自行設計了兩對引物，采用雙重PCR同時擴增上述基因，用8g/L羥丙基甲基纖維素為篩分介質，在50cm×100μm i．d．涂壁毛細管中，于一1
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
實驗方法原理常規聚丙烯酰胺凝膠電泳后的檢測，對于不同的目的，應采用不同的檢測方法。由于這種電泳方法不破壞蛋白質的生物活性，所以可選用的檢測方法很多。試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液Tris-甘氨酸緩沖液貯液電極緩沖液樣品緩沖液過硫醆銨濃縮膠緩沖液貯液分離膠緩沖液貯液實驗步驟一、早期染色方法用染料和生物大
（一）醋酸纖維素薄膜電泳 醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄 膜。這種薄膜對蛋白質樣品吸附性小，幾乎能完全消除紙電泳中出現的“拖尾”現象，又因為膜的親水性比較小，它所容納的緩沖液也少，電泳時電流的大部分由樣 品傳導，所以分離速度快，電泳時間短，樣品
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分
第一節 微生物形態學檢查 細菌形態學檢查是細菌檢驗的重要方法之一，它是細菌分類和鑒定的基礎，可根據其形態、結構和染色反應性等，為進一步鑒定提供參考依據。 一、顯微鏡檢查 由于細菌個體微小，肉眼不能看到，必須借助顯微鏡的放大才能看到。一般形態和結構可用光學顯微鏡觀察，其內部的超微結構則需用電
隨著現代醫學及相關科學技術的發展，各學科相互交叉和滲透，醫學微生物學檢驗技術已深入到細胞、分子和基因水平，許多新技術、新方法已在臨床微生物實驗室得到廣泛應用。醫學微生物學實驗室的基本任務之一是利用微生物學檢驗技術，準確、快速檢驗和鑒定臨床標本中的微生物，并對引起感染的微生物進行耐藥性監測，為臨床對感
實驗概要將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上，與標記的核酸探針進行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。該項技術廣泛被應用在遺傳病檢測、DNA指紋分析和PCR產物判斷等研究中。但由于該技
細胞凋亡（apoptosis）又稱細胞凋謝或稱程序性細胞死亡（Programmed cell death，PCD），是有別于細胞壞死而受基因控制的一種主動性細胞自殺過程。對細胞凋亡的研究已成為當今生物學領域的熱點之一。開展對細胞凋亡的研究，首先要解決的是方法學問題。根據凋亡細胞的生化特征檢測組織或培
Southern 雜交是分子生物學的經典實驗方法。其基本原理是將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上，與標記的核酸探針進行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。該項技術廣泛被應用在遺傳病
本實驗采取堿裂解法的方法來提取質粒 ，之后經瓊脂糖凝膠電泳來檢測DNA。質粒DNA 的提取與鑒定(一)堿裂解法提取質粒[實驗原理]堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0~12.5這個狹窄的范圍內,線性的DNA雙螺旋結構解開而被變
細胞凋亡的圖片5細胞凋亡的圖片6細胞凋亡的研究方法一、定性和定量研究只定性的研究方法：常規瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉瓊脂糖凝膠電泳、形態學觀察（普通光學顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡）進行定量或半定量的研究方法：各種流式細胞儀方法、原位末端標記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。二、區分凋亡和壞死可將二
酶切基礎知識DNA酶切一般分為質粒直接酶切和PCR產物酶切第一節 DNA酶切及凝膠電泳 一.DNA的限制性內切酶酶切分析 限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在
雙重PCR-毛細管電泳法檢測大豆轉基因可應用于快速檢測抗草甘膦轉基因大豆。實驗方法原理針對轉基因大豆基因組中被導入的35S啟動子、NOS終止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因，自行設計了兩對引物，采用雙重PCR同時擴增上述基因，用8g/L羥丙基甲基纖維素為篩分介質，在50cm×100μm
基因突變(gene mutation)是遺傳病和腫瘤發生的根本原因，檢測與遺傳病及惡 性腫瘤發生有關的突變基因(mutant gene)是分子生物學，醫學遺傳學及腫瘤學研究 的熱點，它對闡明遺傳病和腫瘤發生的分子生物學基礎及其診斷和早期診斷具有重要 ＼意義，分子生物學技術的發展，尤其是PCR技術的出
基因突變(gene mutation)是遺傳病和腫瘤發生的根本原因，檢測與遺傳病及惡 性腫瘤發生有關的突變基因(mutant gene)是分子生物學，醫學遺傳學及腫瘤學研究 的熱點，它對闡明遺傳病和腫瘤發生的分子生物學基礎及其診斷和早期診斷具有重要 ＼意義，分子生物學技術的發展，尤其
一、Southern雜交 Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。 (2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。&
【摘要】目的 建立結核分枝桿菌的熒光定量PCR檢測方法,探討熒光 PCR檢測痰標本中結核分枝桿菌的應用價值。方法 根據結核分枝桿菌基因保守序列設計引物和探針，并構建標準品。對102例培養涂陽的結核痰液標本和45例非結核感染者的痰標本，應用熒光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法檢測結核分枝桿菌。 結果 熒
常見問題PCR產物的電泳檢測時間一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚至消失。假陰性，不出現擴增條帶。PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中
結核病是嚴重危及全球的公共衛生問題之一，自1985年以來結核病疫情在全球范圍內急劇上升，據世界衛生組織報道，目前全球有近1/3的人感染了結核桿菌，即20億人口感染了結核桿菌，其中活動性肺結核病人約2 000萬，每年新增結核病人約800～1 000萬，每年約有300萬人死于結核病［1～3］。結核病已成
不同細胞不同狀態是有不同死法的，具體是細胞凋亡、壞死、還是程序性壞死，需要進一步排查分析來確定。而細胞凋亡是個復雜的過程，針對凋亡時期不同，檢測的方法有所不同。那如何去確定哪條途徑被觸發，在哪個步驟被阻斷，以及抑制劑是否能夠抑制呢？下面介紹幾種常用的測定方法。 一：細胞凋亡的形態學檢測 發生
細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式，根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種常用的測定方法。一、細胞凋亡的形態學檢測 根據凋亡細胞固有的形態特征，人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。 1 光學顯微鏡和倒
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～1
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板
PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引
定量PCR 定義 以參照物為標準對PCR終產物進行分析或對PCR過程的進行監測，來評估樣本中靶基因的拷貝數，稱為定量PCR相對定量→絕對定量， 手工操作→自動化檢測， 靈敏度與特異性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR擴增的指數期進行的。 特定的待擴增基因片段 起始含量越大，則指