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1．簡介 寡聚核苷酸引物的選擇，通常是整個擴增反應成功的關鍵。所選的引物序列將決定PCR產物的大小、位置、以及擴增區域的Tm值這個和擴增物產量有關的重要物理參數。好的引物設計可以避免背景和非特異產物的產生，甚至在RNA-PCR中也能識別cDNA或基因組模板。引物設計也極大的影響擴增產量：若使用設計粗糙的引物，產物將很少甚至沒有；而使用正確設計的引物得到的產物量可接近于反應指數期的產量理論值。當然，即使有了好的引物，依然需要進行反應條件的優化，比如調整Mg2+濃度，使用特殊的共溶劑如二甲基亞砜、甲酰胺和甘油。 計算機輔助引物設計比人工設計或隨機選取更有效。一些影響PCR反應中引物作用的因素諸如溶解溫度、引物間可能的同源性等，易于在計算機軟件中被編碼和限定。計算機的高速度可完成對引物位置、長度以及適應用戶特殊條件的其他有關引物的變換可能性的大量計算。通過對成千種......閱讀全文
引物設計簡介1．寡聚核苷酸引物的選擇，通常是整個擴增反應成功的關鍵。所選的引物序列將決定PCR產物的大小、位置、以及擴增區域的Tm值這個和擴增物產量有關的重要物理參數。好的引物設計可以避免背景和非特異產物的產生，甚至在RNA-PCR中也能識別cDNA或基因組模板。引物設計也極大的影響擴增產量：若使用
1．簡介寡聚核苷酸引物的選擇，通常是整個擴增反應成功的關鍵。所選的引物序列將決定PCR產物的大小、位置、以及擴增區域的Tm值這個和擴增物產量有關的重要物理參數。好的引物設計可以避免背景和非特異產物的產生，甚至在RNA-PCR中也能識別cDNA或基因組模板。引物設計也極大的影響擴增產量：若使用設計粗糙
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組寡核苷酸都有固定的起點，但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿
關鍵詞：寡核苷酸；優化設計中圖分類號：Q524 在核酸分子雜交、DNA序列測定和通過PCR放大DNA片段等實驗中，都需要使用寡核苷酸作為探針或引物，而對這些反應的質量起最重要影響作用的，就是這些寡核苷酸探針或引物。用優化的寡核苷酸進行實驗能夠很快得到好
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
1. 引物是如何合成的？ 目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。DNA合成儀有很多種, 主要都是由ABI/PE 公司生產，而Bioneer自行研制的專利384并行高通量DNA合成儀，可實現99%的高合成率。無論采用什么機器合成，合成的原理都相同，主要差別在于合成產率的高低，試劑消耗量的不同和
1. 引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。DNA合成儀有很多種, 主要都是由ABI/PE 公司生產，而Bioneer自行研制的專利384并行高通量DNA合成儀，可實現99%的高合成率。無論采用什么機器合成，合成的原理都相同，主要差別在于合
11. Template DNA preparation 提取DNA時的試劑會抑制PCR反應的順利進行.因此需要對TEMPLATE DNA進行純化.特別是SDS(<0.01%) 的情況下就能強烈抑制PCR的進行. 可以加入一些nonionic試劑,如Tween, Nonid, Tri
1. 引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。DNA合成儀有很多種, 主要都是由ABI/PE 公司生產，而Bioneer自行研制的專利384并行高通量DNA合成儀，可實現99%的高合成率。無論采用什么機器合成，合成的原理都相同，主要差別在于合
基本PCR引物設計參數 引物設計的目的是在兩個目標間取得平衡：擴增特異性和擴增效率。特異性是指發生錯誤引發的頻率。特異性不好或劣等的引物會產生額外無關和不想要的PCR擴增子，在EB染色的瓊脂糖凝膠上可見到；引物效率是指在每一PCR循環中一對引物擴增的產物與理論上成倍增長量的接近程度。&nb
PCR技術必須有人工合成的合理引物和提取的樣品DNA，然后才進行自動熱循環，最后進行產物鑒定與分析。引物設計與合成目前只能在少數技術力量較強的研究院、所進行，臨床應用只需購買PCR檢測試劑盒就可開展工作，PCR自動熱循環中影響因素很多，對不同的DNA樣品，PCR反應中各種成份加入量和溫度循環參數均不
第一節 概述 聚合酶鏈反應或多聚酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction, PCR），又稱無細胞克隆技術(“free bacteria”cloning technique)，是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。該方法一改傳統分子克隆技術的模式，不通過活細胞，操作
PCR實驗技術 PCR（聚合酶鏈式反應） 【原理】&nb
pcr在DNA方面的研究可以說給我們的實際生活帶來了很大的便利。可能我們對它沒有接觸的人并不是非常了解，但對于在破案乃至是多年前難以查破的舊案，有了pcr技術的幫助，案情很快就得到了有效進展。那么，這么厲害的pcr技術是怎樣在DNA上幫助我們的呢？ pcr屬于一種用來放大擴增特定DNA
一、雜交通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
實驗方法原理 在用 oligo (dT) 引物構建的 cDNA 文庫中，偶而發生部分 cDNA 克隆缺失了與靶 mRNA 3' 末端互補的序列。這部分序列到底是在 cDN
聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～1
Primer Premier 4.10Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司開發的專業用于PCR或測序引物以及雜交探針的設計，評估的軟件，和Plasmid Premier2.02一起是該公司推出的最新的軟件產品。其主要界面同樣也是分為序列編輯窗口（Genetank），引物設
Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司開發的專業用于PCR或測序引物以及雜交探針的設計，評估的軟件，和Plasmid Premier2.02一起是該公司推出的最新的軟件產品。其主要界面同樣也是分為序列編輯窗口（Genetank），引物設計窗口（Primer Design），
實驗方法原理 實驗材料 A 和 B 類細胞的雙鏈 cDNA （ds cDNA）
Primer Premier 4.10Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司開發的專業用于PCR或測序引物以及雜交探針的設計，評估的軟件，和Plasmid Premier2.02一起是該公司推出的最新的軟件產品。其主要界面同樣也是分為序列編輯窗口（Genetank），引物設
PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引
PCR引物設計及軟件使用技巧張新宇，朱有康，高燕寧（中國協和醫科大學中國醫學科學院腫瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介紹使用軟件設計PCR引物的技巧。在PCR引物設計原則的基礎上，詳細介紹了兩種常用引物設計軟件的基本使用方法，并對其各自的優缺點進行了比較。一般性引物自動搜索可采用“Prem