蘭州大學PLOS解析赤霉素信號轉導分子機理
2014年7月10日，國際學術期刊《PLOS Genetics》（五年影響因子9.44）在線發表了蘭州大學的一項最新研究成果“Arabidopsis DELLA Protein Degradation Is Controlled by a Type-One Protein Phosphatase, TOPP4”， 該研究揭示了DELLA蛋白去磷酸化修飾的分子機理，解決了GA信號轉導中去磷酸化修飾這一經典的生物學問題，對植物激素信號轉導機理研究和實際生產中農作物改良等具有重要的科學價值。 本文通訊作者為蘭州大學生命科學學院細胞活動與逆境適應教育部重點實驗室的博士生導師侯歲穩教授，其1994年畢業于西北師范大學生物系，1997 年于中科院昆明植物研究所獲碩士學位，2004年在蘭州大學生命科學學院獲博士學位，2002年至2003年，為英國劍橋大學訪問學者，2005年至 2008年在中科院近代物理研究所從事博士后研究。研究方向為植......閱讀全文
什么是磷酸化與去磷酸化
磷酸化，將磷酸基團加在中間代謝產物上或加在蛋白質（protein）上的過程。其中除去磷酸基團的酶稱為磷酸酶。 蛋白質磷酸化可發生在許多種類的氨基酸（蛋白質的主要單位）上，其中以絲氨酸為多，接著是蘇氨酸。去磷酸化：磷酸基團的除去，對許多生物起著“開/關”作用。防止質粒載體的自身連接，最常用于質粒進行單
什么是去磷酸化？
去磷酸化:是磷酸基團的除去，對許多生物起著"開/關"作用。防止質粒載體的自身連接，最常用于質粒進行單酶切連接時。去磷酸化是由于DNA連接酶催化DNA連接時需要有磷酸基團的存在，載體在經酶切后會在切點端保留一個磷酸基團。載體去磷酸化后因自身5'端無磷酸基團，因而不可以和自身3'端連接。
蛋白磷酸酯酶的去磷酸化過程
蛋白磷酸酯酶(PP)-2A和PP-2B可使AD神經原纖維纏結中的II型雙螺旋絲（PHFII-tau）在Ser-199/Ser-202去磷酸化，Ser-396/Ser-404部分去磷酸化;此外，PP-2A和PP-2B可分別使PHFII-tau的Ser-46和Ser-235去磷酸化;去磷酸化后PHFII
關于去磷酸化的簡介
蛋白磷酸酯酶(PP)-2A和PP-2B可使AD神經原纖維纏結中的II型雙螺旋絲（PHFII-tau）在Ser-199/Ser-202去磷酸化，Ser-396/Ser-404部分去磷酸化；此外，PP-2A和PP-2B可分別使PHFII-tau的Ser-46和Ser-235去磷酸化；去磷酸化后PHF
去磷酸化作用的概念
去磷酸化作用是指將磷酸基團加在中間代謝產物上，用于探討阿爾茨海默病(AD)腦損傷逆轉的可能性及其途徑。
質粒DNA的去磷酸化實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 去除 5' 端的磷酸基可防止質粒 DNA 的自身連接和環化。在體外連接反應中，DNA 連接酶可在鄰近的兩個分子間形成磷酸二酯鍵。但只有當一個分子的 5' 端帶有磷酸基另一分子的 3' 端帶有羥基時，這一反
什么是去磷酸化作用？
去磷酸化作用是指將磷酸基團加在中間代謝產物上，用于探討阿爾茨海默病(AD)腦損傷逆轉的可能性及其途徑。
質粒DNA的去磷酸化實驗
實驗方法原理 去除 5' 端的磷酸基可防止質粒 DNA 的自身連接和環化。在體外連接反應中，DNA 連接酶可在鄰近的兩個分子間形成磷酸二酯鍵。但只有當一個分子的 5' 端帶有磷酸基另一分子的 3' 端帶有羥基時，這一反應才能完成。實驗材料 小牛腸堿性磷酸酶（CIP) 或
去磷酸化的對象和方法
一、組織和抗體來源該研究中的AD及年齡、性別匹配對照者的腦組織來源于死后6小時內的尸體解剖(各取6例混合后制備勻漿)，AD確診基于尸檢組織切片的病理學檢查，人腦組織均貯于-75℃直至使用。牛腦PP-2A和PP-2B的分離純化分別參照Cohen等[5]和Sharma等[6]的方法。多克隆抗體92e和1
質粒DNA的去磷酸化實驗
去除 5' 端的磷酸基可防止質粒 DNA 的自身連接和環化。在體外連接反應中，DNA 連接酶可在鄰近的兩個分子間形成磷酸二酯鍵。但只有當一個分子的 5' 端帶有磷酸基另一分子的 3' 端帶有羥基時，這一反應才能完成。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理
關于去磷酸化的結論的介紹
因為tau蛋白異常過度磷酸化并形成PHF被認為是AD神經原纖維退化的基礎，PHF可在體外被蛋白磷酸酯酶去磷酸化的結果提示，AD腦損傷可能是可逆的。 阿爾茨海默(AD)腦中有三種tau蛋白： (1)易溶型非異常磷酸化的tau(C-tau)； (2)易溶型異常磷酸化的tau(ADp-tau)；
磷酸化位點分析實驗用酶和化學方法去磷酸化
實驗材料蛋白樣品實驗步驟這種方法得到特別關注、但它能提供磷酸肽中磷酸化氨基酸的定位，可以在非磷酸肽占主導地位的混合物中鑒別磷酸肽，此方法使用的是磷酸酶 。用簡單的 MALDI-TOF儀器就可以得到磷酸化蛋白水解后產生肽段的質量，同樣的樣品用磷酸酶處理后，除去了絲氨酸，蘇氨酸和酪氨酸上的磷酸，再分析其
克隆中載體的處理和去磷酸化
克隆成功與否,除與連接方式以及載體選擇有關外，載體的處理也是一個重要環節。為了提高連接效率，處理載體時應注意以下幾點：??(1)應加入常用量5～10倍的內切酶水解載體，以保證載體被完全酶切；??(2)如用雙酶切割載體，則必須電泳回收載體片段，除去雙酶切所產生的小DNA片段；?(3)如粘端連接,
克隆中載體的處理和去磷酸化
克隆成功與否,除與連接方式以及載體選擇有關外,載體的處理也是一個重要環節。為了提高連接效率,處理載體時應注意以下幾點:(1)應加入常用量5~10倍的內切酶水解載體,以保證載體被完全酶切;(2)如用雙酶切割載體,則必須電泳回收載體片段,除去雙酶切所產生的小DNA片段;?(3)如粘端連接,單酶切處理過的
去磷酸化的對象和方法的介紹
一、組織和抗體來源 該研究中的AD及年齡、性別匹配對照者的腦組織來源于死后6小時內的尸體解剖(各取6例混合后制備勻漿)，AD確診基于尸檢組織切片的病理學檢查，人腦組織均貯于-75℃直至使用。牛腦PP-2A和PP-2B的分離純化分別參照Cohen等[5]和Sharma等[6]的方法。多克隆抗體9
J－Exp－Med：蛋白去磷酸化修飾調控炎癥微環境的新機制
浙江大學基礎醫學院柯越海課題組與附屬邵逸夫醫院曹倩團隊合作在J Exp Med雜志上發表研究論文"Phosphatase Shp2 exacerbates intestinal inflammation by disrupting macrophage responsiveness to int
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
在 T4 多核苷酸激酶的正向反應中，帶有平端、5' 凹端或分子內切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子標記效率低。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理在 T4 多核苷酸激酶的正向反應中，帶有平端、5' 凹端或分子內切口的 DNA 底物比 5'
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在 T4 多核苷酸激酶的正向反應中，帶有平端、5' 凹端或分子內切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子標記效率低。 實驗材料
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
實驗方法原理 在 T4 多核苷酸激酶的正向反應中，帶有平端、5' 凹端或分子內切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子標記效率低。實驗材料 T4 噬菌體多核苷酸激酶試劑、試劑盒 乙酸銨EDTA乙醇咪唑緩沖液聚乙二醇儀器、耗材 液體閃爍計數儀Sephadex G-50 離心柱Seph
克隆中載體的處理和去磷酸化方法
克隆成功與否,除與連接方式以及載體選擇有關外，載體的處理也是一個重要環節。為了提高連接效率，處理載體時應注意以下幾點：(1)應加入常用量5～10倍的內切酶水解載體，以保證載體被完全酶切；(2)如用雙酶切割載體，則必須電泳回收載體片段，除去雙酶切所產生的小DNA片段；(3)如粘端連接,單酶切處理過的載
通過被磷酸化和去磷酸化來被調節活性的酶有哪些
磷酸化和去磷酸化就是細胞內的信號級聯放大系統。簡單來說，就是細胞針對外界各種信號（物理或者化學）在體內引發一系列指數級的催化反應（多為磷酸化），導致核內特定基因的表達，成功完成對外界信號的應激性。當這種應激完成之后，再經由去磷酸化去除這些蛋白的活力，使細胞恢復到正常狀態。磷酸化是可逆共價修飾中最常見
蛋白質磷酸化
Tyrosine Kinase Assay Using Synthetic Peptides?(T. Miller)Small synthetic peptide substrates are especially well suited for applications such as assay
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料測序級膜蛋白酶試劑、試劑盒二硫蘇糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯儀器、耗材螯合瓊脂糖凝膠層析介質實驗步驟這里所述的方法概括為下列幾個步驟：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性組分中的蛋白質（見 24. 3.1 )；固相金屬螯合親和層析（IMAC) 富集磷酸肽（見 24. 3. 2 )；用串聯質譜對磷酸
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料測序級膜蛋白酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒二硫蘇糖醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?碘代乙酰
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料 測序級膜蛋白酶試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯儀器、耗材 螯合瓊脂糖凝膠層析介質實驗步驟 這里所述的方法概括為下列幾個步驟：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性組分中的蛋白質（見 24. 3.1 )；固相金屬螯合親和層析（IMAC) 富集磷酸肽（見 24. 3. 2 )；用串
磷酸化蛋白指的是什么
買能夠區分磷酸化構型和未磷酸化構型的兩種不同抗體沒有聽過磷酸化因子的概念。你說的兩種都是蛋白質，都是細胞分子信號通路中的重要元素。JAK是一種磷酸激酶，可以將STAT磷酸化。沒有聽說過JAK自身被磷酸化。所以需要區分是否磷酸化的只有STAT。
磷酸化蛋白檢測小妙招
蛋白質磷酸化是一種非常重要且廣泛存在于原核生物和真核生物中的翻譯后修飾調控方式,參與細胞的增殖、發育、分化、凋亡,細胞骨架調控、神經活動、肌肉收縮、新陳代謝及腫瘤發生等,對許多生物的細胞功能起著生物“開/關”作用。蛋白質磷酸化指由蛋白質激酶催化的把ATP的磷酸基轉移到底物蛋白質氨基酸殘基（絲氨酸、蘇
使用Azurespot分析軟件定量非磷酸化與磷酸化蛋白
??背景去除背景扣除對于有效定量是必不可少的。?例如，AzureSpot有五個自動后臺選項和三個手動選項。>?如果背景不均勻，請使用?Rolling Ball。 類似指定半徑的圓盤在泳道輪廓下“滾動”，對信號求平均，從而產生平滑小的變化。 半徑越大，滾動越平滑。>?如果輪廓的末端與輪廓的其余部分沒有
使用Azurespot分析軟件定量非磷酸化與磷酸化蛋白
在上期我們回顧了使用多重來成像磷酸化蛋白的技巧，在這部分中，我們將介紹使用Azurespot分析軟件進行定量。 背景去除 背景扣除對于有效定量是必不可少的。 例如，AzureSpot有五個自動后臺選項和三個手動選項。 > 如果背景不均勻，請使用 Rolling Bal
用堿性磷酸酶進行DNA片段的去磷酸化
實驗材料 牛小腸堿性磷酸酶蝦堿性磷酸酶蛋白酶 K限制性內切核酸酶DNA 樣品試劑、試劑盒 氯仿EDTA乙醇酚氯仿SDS醋酸鈉TETris-ClCIP 去磷酸化緩沖液SAP 去磷酸化緩沖液儀器、耗材 水浴或加熱板實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0)