聚丙烯酰胺凝膠平板等電聚焦電泳測定蛋白質等電點
一、目的：學習聚丙烯酰胺凝膠平板等電聚焦電泳測定蛋白質等電點的原理及方法。二、原理：等電點聚焦（isoelectric focusing, IEF）或簡稱電聚焦（electrofocusing），也曾稱等電點分離聚焦電泳等。它是60年代中期出現的技術，克服了一般電泳易擴散的缺點。近年來，等電點聚焦電泳又有了新的進展，可以分辨等電點只差0.001pH單位的生物分子。由于它的分辨力高、重復性好、樣品容量大、操作簡便、迅速，在生物化學、分類學、分子生物學及臨床醫學研究等諸方面，都得到廣泛應用。等電點聚焦電泳產生pH 梯度的方法有兩種：一是用兩種不同的pH緩沖液相互擴散，在混合區形成pH梯度，此為人工pH梯度。這種pH梯度不穩定，常用于制備電泳；另一種是利用載體兩性電解質在電場作用下形成自然pH梯度。本實驗就是利用載體兩性電解質形成的自然pH梯度進行蛋白質樣品等電焦聚電泳的。理想的載體兩性電解質應該在其本身的等電點處有足夠的緩沖......閱讀全文
聚丙烯酰胺凝膠平板等電聚焦電泳測定蛋白質等電點
一、目的：學習聚丙烯酰胺凝膠平板等電聚焦電泳測定蛋白質等電點的原理及方法。二、原理：等電點聚焦（isoelectric focusing, IEF）或簡稱電聚焦（electrofocusing），也曾稱等電點分離聚焦電泳等。它是60年代中期出現的技術，克服了一般電泳易擴散的缺點。近年來，等電點聚
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
實驗方法原理 實驗原理蛋白質分子是典型的兩性電解質分子。它在大于其等電點的 pH 環境中解離成帶負電荷的陰離子，向電場的正極泳動，在小于其等電點的 pH 環境中解離成帶正由荷的陽離子，向電場的負極泳動。這種泳動只有在等于其等電點的 pH 環境中，即蛋白質所帶的凈電荷為零時才能停止。如果在一個
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
等電聚焦（Isoelectric focusing，簡稱 IEF）是六十年代中期出現的新技術。近年來等電聚焦技術有了新的進展，已迅速發展成為一門成熟的近代生化實驗技術。目前等電聚焦技術已可以分辨等電點（pI）只差 0.001pH 單位的生物分子。由于其分辨力高，重復性好，樣品容量大，操作簡便迅速，在
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗原理蛋白質分子是典型的兩性電解質分子。它在大于其等電點的 pH 環境中解離成帶負電荷的陰離子，向電場的
等電點聚焦電泳
中文名稱等電點聚焦電泳英文名稱isoelectric focusing electrophoresis定 義一種根據蛋白質等電點不同而將蛋白質在凝膠介質中分離的電泳方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
等電聚焦電泳（IEF）分離蛋白及測定蛋白質等電點
一、原理等電點聚焦（IEF）是在電場中分離蛋白質技術的一個重要發展，等電聚焦是在穩定的pH梯度中按等電點的不同分離兩性大分子的平衡電泳方法。在電場中充有兩性載體和抗對流介質，當加上電場后，由于兩性載體移動的結果，在兩極間逐步建立穩定的pH梯度，當蛋白質分子或其他兩性分子存在于這樣的pH梯度中時，這種
聚丙烯酰胺等電聚焦電泳測蛋白質的等電點1
實驗原理所有的氨基酸均為兩性物質，即它們至少含有一個羧基（carboxyl）及一個氨基（α-amino）。這些可游離的基團隨著pH變化可以三種形式存在，即正電荷（cation）、兩性離子（zwitterion）及負電荷（anion）等三種，在酸性溶液中帶正電荷，在堿性溶液中帶負電荷。若氨基酸在某一p
聚丙烯酰胺等電聚焦電泳測蛋白質的等電點2
四、固定、，染色和脫色將凝膠板放在培養皿中，加入固定液，浸泡數小時后，用脫色液清洗兩次，每次10min, 然后加入染色液，室溫下放置15－30min，再用脫色液洗脫數次，直至譜帶清晰，放入保存液中浸泡10min,可制干板。五、制作干膠板1. 取完全浸濕的平整玻璃紙一張，于玻璃板上鋪平，紙與板之間不可
等電聚焦凝膠電泳原理
等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場中移
等電點聚焦電泳的定義
中文名稱等電點聚焦電泳英文名稱isoelectric focusing electrophoresis定 義一種根據蛋白質等電點不同而將蛋白質在凝膠介質中分離的電泳方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
等電點聚焦電泳的技術介紹
中文名稱等電點聚焦電泳英文名稱isoelectric focusing electrophoresis定 義一種根據蛋白質等電點不同而將蛋白質在凝膠介質中分離的電泳方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
等電點聚焦電泳的技術介紹
聚丙烯酰胺凝膠電泳（ polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE），是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術，用于分離蛋白質和寡核苷酸。
等電聚焦水平板電泳法的相關介紹
兩性電解質在電泳場中形成一個pH梯度，由于蛋白質為兩性化合物，其所帶的電荷與介質的pH值有關，帶電的蛋白質在電泳中向極性相反的方向遷移，當到達其等電點（此處的pH值使相應的蛋白質不再帶電荷）時，電流達到最小，不再移動。本法用于檢測蛋白類和肽類供試品的等電點。 除另有規定外按以下方法測定。 1
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術可應用于：(1)蛋白質的分離提純；（2）蛋白質組學研究。實驗方法原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的p
等電點聚焦分離蛋白質實驗
蛋白質可以在包被或非包被的毛細管柱分離，分離方案的選擇取決于靶蛋白的特異屬性。最重要的屬性就是pl，這由一般的凝膠電泳或CE決定。等電點聚焦分離是CE分離的一種。實驗方法原理等電點聚集（IEF） 分離可以通過 CE 輕易地達到，這也是選擇隨后用于蛋白質分離的緩沖液系統的有效的第一步。蛋白質和多肽是兩
等電點聚焦分離蛋白質實驗
等電點聚焦 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 等電點聚集（IEF） 分離可以通過 CE 輕易地達到，這也是選擇隨后用于蛋白質分離的緩沖液系統的有效的第一步。蛋白質和多肽是兩性
等電點聚焦分離蛋白質實驗
實驗方法原理 等電點聚集（IEF） 分離可以通過 CE 輕易地達到，這也是選擇隨后用于蛋白質分離的緩沖液系統的有效的第一步。蛋白質和多肽是兩性的，因此它們的電荷由周圍的載體緩沖液決定。當蛋白質或多肽處于電場中，它移動到一個區域，這里周圍的 pH 等于其等電點（pI）。在包被的毛細管柱內可
蛋白質的分離實驗——IEF（等電點聚焦電泳）法
實驗方法原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，
雙向凝膠電泳的等電聚焦相關介紹
蛋白質是兩性分子，在不同的pH環境中可以帶正電荷、負電荷或不帶電荷。對每個蛋白質來說都有一個特定的pH，此時蛋白質的靜電荷為零，此pH值即該蛋白質的等電點(pI)。將蛋白質樣品加載至pH梯度介質上進行電泳時，它會向與其所帶電荷相反的電極方向移動。在移動過程中，蛋白分子可能獲得或失去質子，并且隨著
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
5.電泳操作步驟：1）將蛋白樣品于等體積的2×上樣緩沖液混合，10000×g離心5min以除去蛋白質沉淀；2）用微量注射器將蛋白質樣品加入到上樣空底部，注意不要溢出來。注意：對于考馬斯亮藍染色液來說，每個泳道10-30ug的蛋白混合粗提物（我們俗稱粗抗原）或者5-10ug單一蛋白組分是較合理的上樣濃
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
6．電泳聚焦后處理測定pH梯度：1）將凝膠條切成0.5cm或1cm的小片；2）將每小片凝膠在1ml 10mM KCl中 浸泡30min；3）測讀此KCl溶液的pH值、凝膠的固定：1）將凝膠于10%三氯乙酸中浸泡10min；2）換成1%三氯乙酸溶液繼續浸泡至少2h以上，以去除載體兩性電解質，浸泡過夜可
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（一）
1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（四）
9．其他要注意的事項1）等電聚焦后可用一根染色的細線（0.1mm）標出染料前沿的位置；2）不同品牌的載體兩性電解質性質上有細微的差別，使用不同來源的載體兩性電解質凝膠時候蛋白質分離樣式略有差異，若要獲得好的重復性一般不要更換載體兩性電解質的品牌；3）通常，窄范圍的pH梯度可以提高分辨率，但是需要時間
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（三）
8.常見問題及解釋1） 若產生模糊條帶則證明聚焦不完全，這可能是由于電泳中的問題或大分子蛋白質限制了其在凝膠中的遷移能力。若聚焦時間過長或過短，條帶的分辨率會下降。增加電壓梯度可以使帶形更加銳利。高分子量蛋白質在瓊脂糖凝膠中可以聚焦的更好。2） 產生歪斜的條帶通常由于不正確的pH梯度，檢查電極是否潔
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（一）
原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場
制備電泳實驗——等電聚焦制備電泳
實驗方法原理等電聚焦制備電泳是一種非變性制備技術。由于等電聚焦電泳技術的特點，因而是一種理想的制備方法。試劑、試劑盒電極液兩性電解質Ultrodex實驗步驟一、液體介質垂直柱狀蔗糖密度梯度等電聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制備和分析目的的等電聚焦方法。載體兩性電解質在蔗糖密度梯度柱中形成 pH
等電聚焦電泳的技術特點
是將兩性電解質加入盛有pH梯度緩沖液的電泳槽中，當其處在低于其本身等電點的環境中則帶正電荷，向負極移動；若其處在高于其本身等電點的環境中，則帶負電向正極移動。當泳動到其自身特有的等電點時，其凈電荷為零，泳動速度下降到零，具有不同等電點的物質最后聚焦在各自等電點位置，形成一個個清晰的區帶，分辨率極高。