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    免疫共沉淀(CoIP)

    實驗方法原理 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是:當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。目前多用精制的prorein A預先結合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應后,beads上的prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合;也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 RIPA BufferPBSProtein A agarose瓊脂糖考馬斯亮藍染色液儀器、耗材 離心機搖床EP管細胞刮子離心管培養板電泳儀電泳槽高效液相色譜儀實驗步驟 ......閱讀全文

    技術和方案18 染色質免疫沉淀

    試劑、試劑盒甲醛甘氨酸TBS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液免疫共沉淀洗脫液TESTE儀器、耗材超聲波粉碎儀實驗步驟1.培養要分析的細胞。每一個樣品,需要在三角瓶中培養 50~100ml 細胞至 OD600 大約為 1。2.甲醛處理細胞交聯蛋白質和 DNA。加甲醛到細胞中至終濃度為 1%(37% 的甲醛按 1

    染色質免疫沉淀技術的應用

    隨著人類基因組測序工作的基本完成,功能基因組學逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域,要想提供蛋白因子直接調控的證據,需要直接檢測蛋白質-DNA的相互作用,而染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)就是一種研

    免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)實驗方法

     基本實驗步驟 (1)收獲細胞,加入適量細胞IP裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上或者4℃裂解30min, 12,000g離心30 min后取上清; (2) 取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液將1μg相應的抗體和10-50 μl protein A

    染色質免疫沉淀(ChIP)技術的難點

    染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,簡稱ChIP)是研究體內蛋白質與DNA相互作用的一種技術。它利用抗原抗體的特異性反應,可以真實地反映體內蛋白分子與基因組DNA結合的狀況。下面我們就最基本的實驗步驟,實驗中的小技巧以及需要注意的問題簡單介紹一下。1.

    Cell特輯:免疫沉淀

      “Cell Press Selections”是由Cell出版社推出的一份推薦文章集合手冊,主要介紹某個生命科學研究領域最新的進展及突出成果。相關特輯內容包括研究論文,評論性文章以及snapshots,涉及了同一領域的方方面面,更為重要的是這些文章由贊助商贊助,可以免費獲取。  蛋白與DNA之間

    體內甲醛交聯及染色質免疫沉淀--研究DNA和蛋白質作用

    染色質由真核基因組包裝而成,它參與了轉錄、復制、重組、修復等許多以DNA一蛋白質相互作用為基礎的生化過程。研究者感興趣的是這些過程涉及到哪些特異的基因或DNA序列,有哪些蛋白質參與。盡管有許多人對染色質進行分類,就像Holde將其分為轉錄活性或非活性位點,但染色質構本身是動態的,并且DNA與非組蛋白

    ChIP-Seq分析常見問題集錦

    染色質免疫共沉淀測序(ChIP-Seq)是指對染色質免疫共沉淀(ChIP)獲得的DNA片段進行大規模測序,并能把所研究蛋白的DNA結合位點精確定位到基因組上。Roche GS FLX Titanium 、Illumina Hiseq2000和AB SOLID 4 這3種測序技術均可以用于ChIP-

    免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗

    免疫沉淀法             實驗方法原理 通過免疫沉淀,用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步

    染色質免疫共沉淀研究

    真核生物的基因組DNA以染色質的形式存在,研究蛋白質與DNA在染色質環境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。與傳統的EMSA技術相比,染色質免疫沉淀技術(ChIP)能真實完整地反映結合在DNA序列上的調控蛋白,是目前研究體內DNA與蛋白質相互作用的最佳方法。染色質免疫沉淀技術(chro

    免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗

    實驗方法原理 通過免疫沉淀,用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物,第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌,以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物,蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說,純化的蛋

    免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗

    實驗方法原理通過免疫沉淀,用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物,第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌,以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物,蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說,純化的蛋白質

    蛋白濃縮方法基本

    蛋白濃縮方法基本有: 丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸銨沉淀法;(低溫)有機溶劑沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超濾法;透析法;離子交換層析和冷凍干燥法…… 1,丙酮沉淀法;三氯醋酸沉淀法 試驗要求的儀器簡單,但是常常導致蛋白質變性。 2,免疫沉淀法:得有特異性抗體

    免疫沉淀試劑使用說明

    我們的HA-PrecipHen?由共價附著于瓊脂糖珠上的雞抗HA表位標簽抗體制成。它設計用于在免疫沉淀(IP),染色質免疫沉淀(ChIP)和蛋白質純化應用中與HA表位標記的蛋白質一起使用。我們的IgY-PrecipHen?由山羊抗雞IgY制成。共價附于瓊脂糖珠的抗體。它設計用于免疫沉淀(IP),染色

    聚乙二醇沉淀法檢測循環免疫復合物

    實驗概要免疫復合物存在的形式有三種,一是大的免疫復合物(大于19S),可被單核巨噬細胞系統吞噬消除;二是中等大的免疫復合物(約等于19S),沉著于局部,如腎臟基底膜、皮膚基底膜、肝臟間質、血管內壁、肌肉、關節滑膜、內分泌腺等處,這些復合物可激活補體,導致組織損傷;第三類是小的免疫復合物(小于19S)

    小鼠藥物干預后兩種蛋白的磷酸化酪氨酸水平檢測

    小鼠XX細胞藥物干預后兩種蛋白的磷酸化酪氨酸水平檢測 實驗分組:小鼠XX細胞,按下面分組進行藥物干預培養,并收集細胞進行免疫沉淀實驗。 1正常對照組2高糖組3高糖+E藥物4高糖+A藥物(25μM)5高糖+A藥物(50μM)6高糖+A藥物(100μM)7高糖+A藥物(100μM)+B藥物(1mM)8高

    臨床質譜培訓班圓滿收官 聚焦LC-MS檢測項目與解決方案

      分析測試百科網訊 2018年4月25-27日,由復旦大學附屬中山醫院檢驗科主辦、國家級I類繼續教育學習班——“液相色譜-質譜技術臨床應用培訓班”在復旦大學附屬中山醫院獨山廳舉辦。本次活動圍繞LC-MS/MS技術在我國臨床檢驗領域的應用,邀請了國內外著名專家教授,向學員們講授了液相色譜-質譜檢測技

    在免疫沉淀IP&免疫熒光IF如何正確的選擇Flag標簽抗體?

    在免疫沉淀IP&免疫熒光IF如何正確的選擇Flag標簽抗體?Flag標簽系統是已被公認的用于表達、純化以及檢測融合蛋白的表達系統,廣泛應用于Western blotting、免疫細胞組化、免疫共沉淀、流式細胞術、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個研究領域。Flag標簽是一個與重組蛋白相

    組織免疫沉淀中染色質的制備

    實驗概要此步驟描述了從組織中制備染色質,以用于后續的染色質免疫沉淀反應。每個免疫沉淀/抗體反應推薦使用肝組織 30 mg,但組織使用量可根據實際進行調整。每種組織的用量依據組織蛋白豐度、抗體親和力和交聯效率而定。每個免疫沉淀反應最適染色質的量為 5-15 μg 。每次交聯免疫沉淀反應之前,需根據不同

    植物染色質免疫沉淀試劑盒的使用說明

    EpiQuik?植物染色質免疫沉淀試劑盒包括全套的試劑,允許試驗者有效地在體內研究蛋白-DNA相互關系。整個過程可以在6小時內完成,產品效果遠遠優于任何競爭對手的試劑盒。EpiQuik?植物染色質免疫沉淀試劑盒適用于將特異性免疫沉淀與定性和定量PCR、ChIP-Seq、ChIP-on-chip結合使

    MAP1B單克隆抗體產品說明書(中文版)

    主要用途 MAP1B單克隆抗體是一種旨在用于免疫組織化學、免疫沉淀和免疫印跡實驗的鼠源單克隆IgG抗體蛋白。常用于免疫熒光、細胞流式、Western Blot、免疫組化、免疫沉淀等實驗。產品即到即用,性能穩定,免疫活性保證。技術背景微管相關蛋白(microtubule associated

    免疫共沉淀(Co-IP)

    免疫共沉淀可應用于:(1)測定兩種目標蛋白質是否在體內結合;(2)確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔;(3)分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。實驗方法原理以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法,是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是:當細胞在非

    廣西大學最新文章:改進染色質免疫共沉淀方法

      作為研究基因表達調控的重要方法,近年來染色質免疫共沉淀得到了越來越廣泛的應用,但有關將乳腺組織作為ChIP材料的研究及其方法尚未見報道。  近期來自廣西大學亞熱帶農業生物資源保護與利用國家重點實驗室等處的研究人員提出了一種新型乳腺組織染色質免疫共沉淀方法,這種方法獲得的DNA樣品中, 靶序列得到

    Nat Rev Genetics | 環狀RNA的合成與功能

      環狀RNA(circular RNA,circRNA)是一種新興的內源性非編碼RNA(noncoding RNA,ncRNA),是繼microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非編碼RNA家族中極具研究潛力的新成員。越來越多的研究表明,環狀RNA具

    探索RNA與蛋白的相互作用,你需要這兩種檢測

      從DNA到蛋白質,這是一個相當復雜的過程。轉錄DNA的代碼,這只是萬里長征的第一步。隨后,大量蛋白質編輯RNA,帶領它從細胞核到細胞質,控制其穩定性,并指導其翻譯。  據印第安納大學的副教授Sarath Chandra Janga介紹,數百個RNA結合蛋白(RBP)參與了這個過程。Janga正在

    染色質免疫沉淀DNA分析

    實驗概要染色質免疫共沉淀是一種強力的方法,來聯系蛋白質或其修飾的定位與基因組的關系。染色質分離并用特異性抗體判斷是否與特異性  DNA 序列相結合。染色質免疫沉淀法亦可用來檢測目的位點在基因組中的時空分布(用芯片或 DNA 測序)。本操作規程詳細闡述了交聯染色質免疫沉淀 &nbs

    2012中國醫學科學院蛋白質組學研討會大會報告

      中國醫學科學院基礎醫學研究所 高友鶴教授  來自中國醫學科學院基礎醫學研究所的高友鶴教授以幽默詼諧的方式為與會者闡述了《尿蛋白質組和生物標志物研究》的內容。   高教授首先介紹了尿蛋白具有以下特點:1.正常尿蛋白質組相對簡單,病理狀態下比較復雜;2.尿蛋白的影響因素比較多;3.對泌尿系

    免疫雙擴散檢測抗GFP血清抗體

    實驗概要本實驗利用免疫雙擴散檢測了抗GFP血清抗體。實驗原理在溶液中的可溶性多價抗原與血清抗體相遇,當兩者的比例適當時可以形成一種網狀的不溶性的大分子復合物,這叫作免疫沉淀反應。當這樣的抗原和相應的抗體在含有電解質的瓊脂凝膠中相對擴散時,在抗原與抗體的比例適當處會形成可見的沉淀線,這叫免疫雙擴散實驗

    免疫共沉淀詳細步驟

    實驗概要免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。本實驗詳細介紹了免疫共沉淀的詳細步驟及注意事項。實驗原理當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋

    免疫篩選實驗

    根據抗原-抗體相互作用的原理從群體中選出目的物的技術。如用抗體檢測表達型的基因文庫所合成的蛋白質,從而篩選出目的基因的克隆。實驗方法基本方案 實驗材料 cDNA  試劑、試劑盒 BHI 氯霉素 NaOH SSC 氯仿 異戊醇 TES SDS mRNA 甲硫氨酸 乙醇 乙酸鈉 免疫沉淀緩沖液

    免疫篩選實驗

    實驗材料 cDNA試劑、試劑盒 BHI氯霉素NaOHSSC氯仿異戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸鈉免疫沉淀緩沖液儀器、耗材 轉子硝酸纖維濾膜離心管微量多孔洗滌儀實驗步驟 1.  往微量滴定板的每孔中加入250 μl 含適當抗生素的選擇性BHI培養液,并分別接種獨立的cDNA克隆,3

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