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應用末端截切、進化、再延長技術提高酶穩定性的...（三）

3.7 全長突變體的構建優化的 N△5-S3/6 被再延長來研究突變對被截切后的不穩定蛋白質的互補作用。根據圖 16.2A，被截切的氨基酸重新被加上，從而得到全長基因——被命名為 FL-S3/6 的克隆。這個突變體定位在細胞間質，在 E.coli XL-1 Blue 中表達來檢測體內功能。讓人意外的是，在含氯霉素和 100 μg/ml 氨芐板上于 37°C 20 h 生長的克隆數目只有不含氨芐的對照板上的 50%。這和 N△5-S 3/6 在兩個板上得到相同數目克隆成鮮明對比。為了研究蛋白質功能和蛋白質定位，對 FL-S 3/6 和 N△5 - S3/6 的細胞粗提液做酶活反應。沒有看到對發色底物頭孢硝噻吩的水解反應的區別，說明酶的定位是很重要的。與這些數據相符合的是在 FL- S 3/6 的純化過程中也能看到信號肽剪切的減少（見 16.3.8)。因此，可在細胞質內表達的 FL- S3/6-cyt 被......閱讀全文