定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技術有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術是指以外參或內參為標準,通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測,進行PCR起始模板量的定量。 廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種類型:(1)外參法+終產物分析。所謂“外參法”是指樣本與陽性參照在兩個反應容器內反應。這種類型沒有對樣本進行質控監測,易出現假陰假陽結果,沒有監測擴增效率,定量不準。(2)內參法+終產物分析。所謂“內參法”是指樣本與陽性參照在一個反應容器內反應。這種類型對樣本進行質控監測,排除假陰結果,但是定量不準。(3)外標法+過程監測。這種類型監測擴增效率,陽性樣本定量準,但是無法排除假陰結果。(4)內參法+過程監測。由于樣本與陽性參照在一個容器內反應,用同樣的Taq酶和反應參與物,存在竟爭性抑制,起始模板量濃度高的反應會抑制起始模板量濃度低的反應,所以定量不準。(5)外標法+過程監測+內對......閱讀全文
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增。在擴增反應結束之后,我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析。無論定性還是定量分析,分析的都是PCR終產物。但是在許多
定量PCR 定義 以參照物為標準對PCR終產物進行分析或對PCR過程的進行監測,來評估樣本中靶基因的拷貝數,稱為定量PCR相對定量→絕對定量, 手工操作→自動化檢測, 靈敏度與特異性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR擴增的指數期進行的。 特定的待擴增基因片段 起始含量越大,則指
實時熒光定量PCR在人感染豬流感診斷中的作用彭年才12 張鎮西1 蘭鄒然3 黃兵3 李紅東2 李明2 苗保剛2 1西安交通大學生物醫學分析技術與儀器研究所 2西安天隆科技有限公司 3山東省動物疾病預防與控制中心200
劉向國 謝國明 (重慶醫科大 重慶市 400016)摘 要 熒光定量PCR儀技術是一種新的核酸定量技術,該技木在PCR儀反應系統中引人了熒光標記探針,具有可實時監測,高靈敏性,高特異性和高精確性的特點,極大地克服了原有PCR儀技術的不足,擴大了PCR儀的應用范圍。關鍵詞 定量pcr;熒光;基因Flu
聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)是微量核酸擴增的有效工具,由于其靈敏、特異、快速等優點,在醫學上已廣泛應用與病毒、細菌病原體及遺傳病、腫瘤的早期診斷。隨著PCR技術的發展,特別是病毒或腫瘤的治療監測、疾病的診斷、機體基因表達調控方面,不僅需要檢測其存在是否
自1985年 Mullis 發明了體外多聚酶鏈反應(PCR)至今, PCR在遺傳病、病原體、癌基因等分子診斷領域和法醫鑒定等方面發揮了巨大作用.今天的第三代PCR技術, 即絕對定量的數字化 PCR也備受關注。來自西安交通大學生命科學與技術學院等處的研究人員近期發表綜述,介紹了 PCR 技術的發展
聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測核酸分子的定性方法,而且也是一個能對核酸分子進行精確定量的有力工具[1]。隨著分子生物學技術研究的不斷進展,定量PCR技術取得了突飛猛進的發展,不僅建立了一系
實時熒光定量PCR技術(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR,如果用于RNA檢測,這被稱為逆轉錄實時PCR即Real-time RT-PCR)是實時PCR法,它是指對DNA或經過反轉入(RT-PCR
數字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子絕對定量技術。相較于qPCR,數字PCR可讓你能夠直接數出DNA分子的個數,是對起始樣品的絕對定量。數字PCR是近年來迅速發展起來的一種定量分析技術。該技術結果判定不依賴于擴增曲線的循環閾值(Ct),不受擴增效率的影響,具有很好的準確度
實時熒光定量PCR(Real-time PCR,QPCR,熒光定量)分類以及實驗步驟介紹實時熒光定量PCR(Real-time PCR,QPCR,熒光定量)技術(Real-time quantitative PCR),是指在(QPCR,熒光定量)反應體系中加入熒光基因,
定量PCR是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied biosystems公司推出,它是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用對熒光信號積累的實時檢測來監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。該
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增。在擴增反應結束之后,我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析。無論定性還是定量分析,分析的都是PCR終產物。但是在
1、Ct值的定義在熒光定量PCR技術中,有一個很重要的概念--Ct值。C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。2、熒光域值(threshold)的設定PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設置是3-
實時熒光定量PCR技術是指在PCR反應體系中加入熒光染料或熒光集團,利用熒光信號來實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板濃度進行定量分析。 病原學檢測是動物疾病確診的關鍵點,而聚合酶鏈式反應(PCR)是目前病原檢測的最常用的分子生物學技術,具有高敏感性的特征。PCR技術發展已日趨完
摘要:近年來,食品安全問題得到了全社會的關注,食品檢測技術得到了更多的重視,生物技術等新興的食品檢測技術也因此而得到了廣泛的應用。文章在簡要介紹生物技術的基礎上,詳細闡述了生物技術在食品檢測中的應用,以期為生物技術的發展與應用提供新的思路。 食品安全問題是由于食品中含有毒、有害物質
摘要:隨著食品工業持續、快速地發展,傳統的方法已經不能夠 滿足當前對食品檢測的更高要求了,人們要求更為簡便快捷、靈活 性強、特異性高的先進的檢測方法,而現代的生物技術的快速發展 使食品的檢測方法更加多樣、準確、迅速及安全,也就是說生物技 術的應用滿足了現代食品檢測的更高要求。 關鍵詞:食品檢測;生物
定量PCR儀主要由兩部分組成,一個是PCR系統,一個是熒光檢測系統。從前面的原理介紹不難看出選擇定量PCR儀的關鍵——由于定量PCR必需借助樣本和標準品之間的對比來實現定量的,對于定量PCR系統來說,重要的參數除了傳統PCR的溫控精確性、升降溫速度等等,更重要的還在于樣品孔之間的均一性
熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,最難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:模板DNA的變性,模板DNA與引物的退火(復性),引物的延伸。重復循環變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2~4分鐘, 2~3小
光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,最難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳資
(2)反應增強劑:PCR反應中加入一定濃度的增強劑如1%~10%二甲基亞砜(DMSO)、5%~20%甘油、非離子去污劑、1.25%~10%甲酰胺和10~100 μg/ml牛血清白蛋白等可提高反應特異性和產量,有些反應只能在這些輔助劑存在時才能進行。(3)熱啟動PCR:如果PCR反應混合物置于低于Tm
熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,zui難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀,面對各種不同性能的產品,您又該如何選擇呢?今天巴玖小編為您講解一下熒光定量PCR儀選擇要點及誤區
熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,zui難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀,面對各種不同性能的產品,您又該如何選擇呢?今天巴玖小編為您講解一下熒光定量PCR儀選擇要點及誤區首先建議大家
數字PCR技術的原理數字PCR(Digital PCR-dPCR)技術是一種新的核酸檢測和定量方法,與傳統定量PCR(qPCR)技術不同,數字PCR采用絕對定量的方式,不依賴于標準曲線和參照樣本,直接檢測目標序列的拷貝數。由于這種檢測方式具有比傳統qPCR更加出色的靈敏度和特異性、精確性,dPCR迅
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熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,zui難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳
熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,zui難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳
基因突變(gene mutation)是遺傳病和腫瘤發生的根本原因,檢測與遺傳病及惡 性腫瘤發生有關的突變基因(mutant gene)是分子生物學,醫學遺傳學及腫瘤學研究 的熱點,它對闡明遺傳病和腫瘤發生的分子生物學基礎及其診斷和早期診斷具有重要 \意義,分子生物學技術的發展,尤其是PCR技術的出
基因突變(gene mutation)是遺傳病和腫瘤發生的根本原因,檢測與遺傳病及惡 性腫瘤發生有關的突變基因(mutant gene)是分子生物學,醫學遺傳學及腫瘤學研究 的熱點,它對闡明遺傳病和腫瘤發生的分子生物學基礎及其診斷和早期診斷具有重要 \意義,分子生物學技術的發展,尤其
聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)是微量核酸擴增的有效工具,由于其靈敏、特異、快速等優點,在醫學上已廣泛應用與病毒、細菌病原體及遺傳病、腫瘤的早期診斷。隨著PCR技術的發展,特別是病毒或腫瘤的治療監測、疾病的診斷、機體基因表達調控方面,不僅需要檢測其存在