熒光免疫技術熒光的基本知識
熒光的基本知識：1.熒光偏振。2.熒光壽命：熒光物質被激發后產生的熒光衰減到一定程度時所用的時間稱為熒光壽命。3.熒光：某些物質受到一定波長光的激發后，在極短時間內發射出的波長大于激發光波長的光。4.激發光譜：固定檢測發射光熒光波長，用不同波長的激發光照射樣品所記錄到的相應的熒光發射強度譜圖。5.發射光譜：固定激發光波長，在不同波長下所記錄到的樣品所發射的熒光強度譜圖。激發態電子回到的能級不同，發出的熒光波長就不同。6.熒光效率：熒光物質分子將光能轉變成熒光的百分率稱為熒光效率。在一定范圍內，熒光強度與激發光強度呈正相關，即激發光越強，熒光越強，但過強的激發光會使熒光很快褪去。7.熒光淬滅：熒光物質在某些理化因素(如紫外線照射、高溫、苯胺、酚、I-、硝基苯等)作用下，發射熒光減弱甚至消退，稱為熒光淬滅，這是由于激發態分子的電子不能回復到基態，所吸收的能量無法以熒光的形式發射。......閱讀全文
熒光免疫技術熒光的基本知識
熒光的基本知識：1.熒光偏振。2.熒光壽命：熒光物質被激發后產生的熒光衰減到一定程度時所用的時間稱為熒光壽命。3.熒光：某些物質受到一定波長光的激發后，在極短時間內發射出的波長大于激發光波長的光。4.激發光譜：固定檢測發射光熒光波長，用不同波長的激發光照射樣品所記錄到的相應的熒光發射強度譜圖。5.發
熒光免疫技術熒光的基本知識
熒光的基本知識：1.熒光偏振。2.熒光壽命：熒光物質被激發后產生的熒光衰減到一定程度時所用的時間稱為熒光壽命。3.熒光：某些物質受到一定波長光的激發后，在極短時間內發射出的波長大于激發光波長的光。4.激發光譜：固定檢測發射光熒光波長，用不同波長的激發光照射樣品所記錄到的相應的熒光發射強度譜圖。5.發
熒光免疫技術
熒光免疫技術是標記免疫技術中發展最早的一種。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術（fluorescentantibod
熒光免疫技術的熒光物質有哪些？
(一)熒光色素1.異硫氰酸熒光素(FITC)：呈現明亮的黃綠色熒光。2.四乙基羅丹明(RB200)：呈橘紅色熒光。3.四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)：呈橙紅色熒光。4.藻紅蛋白(R-RE)：呈明亮的橙色熒光。(二)其他熒光物質1.鑭系螯合物：其中以Eu3+應用最廣。Eu3+螯合物的激發光波長范圍
熒光免疫技術的熒光物質有哪些？
(一)熒光色素1.異硫氰酸熒光素(FITC)：呈現明亮的黃綠色熒光。2.四乙基羅丹明(RB200)：呈橘紅色熒光。3.四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)：呈橙紅色熒光。4.藻紅蛋白(R-RE)：呈明亮的橙色熒光。(二)其他熒光物質1.鑭系螯合物：其中以Eu3+應用最廣。Eu3+螯合物的激發光波長范圍
免疫熒光技術
免疫熒光技術1）??直接法1．標本經固定后，PBS洗滌3×3分鐘。2．加熒光素標記的抗體，濕盒內37℃孵育50分鐘。3．PBS洗滌3×3分鐘。4．0.1％伊文氏蘭復染。5．PBS洗3次，蒸餾水洗2次，每次3分鐘，以除去NaCl結晶。6．緩沖甘油封片，鏡檢。?2）??間接法1．標本固定后，PBS洗滌3
免疫熒光技術
基本原理 將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。試劑與儀器l??????????磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：
免疫熒光技術
免疫熒光技術是標記免疫技術中發展最早的一種．它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記抗體獲得成功。經過幾十年的發展，該技術已相當成熟。 用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的
免疫熒光技術
實驗方法原理 直接法是以熒光素標記的抗體直接與標本內的抗原反應，形成抗原—熒光素標記抗體復合物。根據熒光的分布位置及強度，確定相應抗原的存在與否及其所在部位。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBS伊文氏蘭儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. 標本經固定后，PBS洗滌3×3 分鐘；2. 加熒光素標記的抗體，濕
熒光免疫技術介紹
熒光免疫技術是標記免疫技術中發展最早的一種。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術（fluorescentantib
免疫熒光技術的所需熒光物質介紹
⑴熒光物質1）熒光色素許多物質都可產生熒光現象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有：⑴異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。
免疫熒光技術的合適熒光素的選擇
1）具有與蛋白質形成共價鍵的化學基團。熒光素-N=C +NH-蛋白質 熒光素-N-C-N-蛋白質‖ ︱ ︱‖ ︱S H H SH2）熒光效率高，標記后下降不明顯。3）熒光色澤與背景色澤對比鮮明。4）標記后能保持生物學活性和免疫活性5）標記方法簡單、快速。6）安全無毒
關于免疫熒光技術的常見熒光的介紹
熒光素 1)FITC 2)RB200 3)TRITC 4）鑭系：Eu、Tb 5)PE 6）其它 常見熒光素的特性 1)FITC：黃色結晶粉末，吸收光：490~495nm，發射光：520~530nm，明亮的黃綠色熒光。 2)RB200：橘紅色粉末，吸收光570nm，發射光595~
免疫熒光技術技術分類
⑴ 熒光抗體技術抗原抗體反應后，利用熒光顯微鏡判定結果的檢測方法。⑵ 免疫熒光測定抗原抗體反應后，利用特殊儀器測定熒光強度而推算被測物濃度的檢測方法⑴熒光物質1）熒光色素許多物質都可產生熒光現象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染
免疫熒光技術技術特點
該技術的主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程序也還比較復雜。熒光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性污染，并且大多操作簡便，便于推廣。國外生產的TDM用試劑盒，有相當一部分
免疫熒光技術技術原理
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。直接法將標記的特異性
免疫熒光技術技術分類
⑴ 熒光抗體技術抗原抗體反應后,利用熒光顯微鏡判定結果的檢測方法。⑵ 免疫熒光測定抗原抗體反應后,利用特殊儀器測定熒光強度而推算被測物濃度的檢測方法⑴熒光物質1)熒光色素許多物質都可產生熒光現象,但并非都可用作熒光色素。只有那些能產生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染
免疫熒光技術的技術分類
⑴ 熒光抗體技術抗原抗體反應后，利用熒光顯微鏡判定結果的檢測方法。⑵ 免疫熒光測定抗原抗體反應后，利用特殊儀器測定熒光強度而推算被測物濃度的檢測方法。
免疫熒光技術的技術特點
免疫熒光技術（Immunofluorescence technique ）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
免疫熒光技術的技術分類
⑴ 熒光抗體技術（熒光顯微鏡技術） 抗原抗體反應后，利用熒光顯微鏡判定結果的檢測方法。 ⑵ 免疫熒光測定技術 抗原抗體反應后，利用特殊儀器測定熒光強度而推算被測物濃度的檢測方法 ⑴熒光物質 1）熒光色素 許多物質都可產生熒光現象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產生明顯的熒光并能作
免疫熒光技術的技術原理
免疫熒光細胞化學是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看
免疫熒光技術的技術分類
⑴ 熒光抗體技術抗原抗體反應后，利用熒光顯微鏡判定結果的檢測方法。⑵ 免疫熒光測定抗原抗體反應后，利用特殊儀器測定熒光強度而推算被測物濃度的檢測方法⑴熒光物質1）熒光色素許多物質都可產生熒光現象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染
免疫熒光技術特點
該技術的主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程序也還比較復雜。 熒光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性污染，并且大多操作簡便，便于推廣。國外生產的TDM用試劑盒，有相
免疫熒光技術簡介
一些基本概念和基本知識：1 熒光免疫測定技術的概念：將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標記，試劑與標本中相應的抗體或抗原反應后，測定復合物中的熒光素，這種免疫技術，稱為免疫熒光素技術。2.技術分類：??⑴熒光抗體技術(熒光顯微鏡技術)? ?? ?抗原抗體反應后，利用熒光顯微鏡判? ?? ?定結果的檢測
熒光免疫測定技術
熒光免疫測定技術的概念：將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標記，試劑與標本中相應的抗體或抗原反應后，測定復合物中的熒光素，這種免疫技術，稱為免疫熒光測定技術。熒光免疫測定技術分類：熒光抗體技術（熒光顯微鏡技術）：抗原抗體反應后，利用熒光顯微鏡判定結果的檢測方法。免疫熒光測定技術：抗原抗體反應后，利用特
時間分辨熒光免疫技術
第一部份：時間分辨的原理、我國乙肝兩對半的流行情況及時間分辨在乙肝兩 對半上 的應用技術 一、時間分辨熒光分析（ Time-resolved Fluorescence Immunoassay TRFIA ）的基本原理。 TRFIA 是用三價稀土離子及其螯合劑作為示蹤物，如 銪 （ Eu3+ ）
時間分辨熒光免疫技術
第一部份：時間分辨的原理、我國乙肝兩對半的流行情況及時間分辨在乙肝兩 對半上 的應用技術一、時間分辨熒光分析（ Time-resolved Fluorescence Immunoassay TRFIA ）的基本原理。 TRFIA 是用三價稀土離子及其螯合劑作為示蹤物，如 銪 （ Eu3+ ）、
免疫熒光染色技術
抗原物質固定劑固定條件（min）蛋白質抗原95%～100%乙醇室溫3～10酶、激素丙?酮4℃?30免疫球蛋白四氯化碳病?毒丙酮、四氯化碳、無水乙醇室溫5～10或4℃?30～60多糖、細菌等微火加熱，甲醇、10%甲醛、丙酮室溫5～10或4℃?30～60類?脂?（異嗜性抗原）10%甲醛，10%佛茂爾（F
時間分辨熒光免疫技術
第一部份：時間分辨的原理、我國乙肝兩對半的流行情況及時間分辨在乙肝兩 對半上 的應用技術一、時間分辨熒光分析（ Time-resolved Fluorescence Immunoassay TRFIA ）的基本原理。 TRFIA 是用三價稀土離子及其螯合劑作為示蹤物，如 銪 （ Eu3+ ）、 鋱
免疫熒光技術簡介
免疫熒光技術（Immunofluorescence technique） 1941年，Coons等于首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術（fluorescent antibody technique）。該技術的主要特點是：特異性強、敏