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方案20.1 冷凍細胞 實驗方法原理 細胞生長至對數晚期，以培養基制備高濃度細胞懸液，加入細胞保護劑，等份轉移至凍存管中，緩慢冷凍（圖 20.8）。 細胞用胰酶消化后，加入含有細胞保護劑的培養基，分裝至凍存管中，然后將其夾到鋁條上，用紙質管包裹，放入隔熱儲存管中。將儲存管及其內容物于-70℃或-80℃存放4h或過夜，最后將含有凍存管的紙質管置入液氮罐的儲存管中。 實驗步驟 材料無菌準備凍存的細胞（如果是貼壁細胞：配制無菌PBSA和0.25%的粗胰蛋白酶）生長培養基（血清能促進冷凍后細胞的存活；血清濃度可達5......閱讀全文
復蘇技術1. 細胞復蘇的原則在實際操作中，凍存細胞要進行復蘇，再培養傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內，再次形成胞內結晶損傷細胞。2. 細胞復蘇的主要操作步驟（1）佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。（2）迅速放入38℃水浴中，并不時搖動
1 儲存溫度 生物樣本的長期儲存通常使用盡可能低的溫度來降低樣本內的生化反應提高樣本內各種成分的穩定性。生物大分子、細胞、組織和器官的常用儲存溫度有-80℃(超低溫冰箱), -140℃(液氮氣相或深冷冰箱)以及-196℃(液氮液相)，溫度越低樣本的穩定保存時間越長。0～-60℃是水的結晶溫度，
細胞冷凍離心機分類方法有多種。1、按分離目的可分：實驗室細胞冷凍離心機和工業細胞冷凍離心機。2、按結構可分：細胞臺式冷凍離心機和細胞立式冷凍離心機。3、按容量可分：細胞微量冷凍離心機和細胞大容量冷凍離心機。4、按產地可分：國產細胞冷凍離心機和進口細胞冷凍離心機。5、按速度可分：細胞低速冷凍離心機和細
程序降溫/分步降溫（programmed freezing/stepwise freezing） 通過控制樣本的降溫速度可以盡量減少冰晶損傷和溶液損傷。降溫速度的控制可通過在不同的溫度下分階段降溫（stepwise freezing）或者程序控制降溫（pr
低溫保護劑諸如二甲基亞砜（DMSO）、甘油和丙二醇等已經被廣泛用于冷凍保存細胞和組織。DMSO是細胞保存中最常用的滲透型冷凍劑，但它對細胞也存在一定的毒性，常溫下能使胞內蛋白變性。DMSO導致的不良反應在動物實驗中已被證實。在一些臨床治療案例中，注射了含有DMSO的造血干細胞的病人表現出惡心、頭痛、
細胞培養所用玻璃及塑料制品的清洗與消毒 清洗 在組織細胞培養中，體外細胞對任何有害物質都非常敏感。微生物產品附帶雜物，上次細胞殘留物及非營養成分的化學物質，均能影響培養細胞的生長。因此對新使用玻璃器 皿和重新使用的培養器皿都要嚴格徹底的清洗，且要根據器皿的組成材料不同，選擇不同 的清
消化液：分離組織和分散細胞。常用的有胰蛋白酶和二乙胺四乙酸二鈉 (EDTA) 兩種溶液。可以 單獨使用，也可以混合使用。（1）胰蛋白酶溶液胰蛋白酶（簡稱胰酶）是一種黃白色粉末，易潮解，應放置冷暗干燥處保存。目前應用的胰蛋白酶主要來自牛或豬的胰腺。胰酶的主要作用是使細胞間的蛋白質水解，使細胞相
細胞臺式冷凍離心機分類方法有多種。1、按速度可分：細胞臺式冷凍低速離心機和細胞臺式冷凍高速離心機。2、按分離規模可分：小型細胞臺式冷凍離心機和大型細胞臺式冷凍離心機。3、按分離目的可分：細胞化驗室臺式冷凍離心機和細胞工業臺式冷凍離心機。4、按分離功能可分：分析型細胞臺式冷凍離心機和制備型細胞臺式冷凍
由于體外受精-胚胎移植的高昂費用、有限成功率和多余胚胎的存在，以及政策和倫理對胚胎移植數目的限制，從最大限度地保護患者利益出發，應盡可能提高每一取卵周期的臨床妊娠率，因而胚胎冷凍技術極為重要。胚胎冷凍造成細胞損傷機制胚胎冷凍對活組織和細胞進行冷凍保存時，冷凍過程將可能對細胞造成損傷。主要的損傷機制包
一、細胞冷凍保存 1、材料： 生長良好之培養細胞、新鮮培養基、DMSO（Sigma D-2650）、無菌塑料冷凍保存管（Nalgene 5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球計數盤與蓋玻片、等
細胞培養所用玻璃及塑料制品的清洗與消毒清洗在組織細胞培養中，體外細胞對任何有害物質都非常敏感。微生物產品附帶雜物，上次細胞殘留物及非營養成分的化學物質，均能影響培養細胞的生長。因此對新使用玻璃器 皿和重新使用的培養器皿都要嚴格徹底的清洗，且要根據器皿的組成材料不同，選擇不同 的清洗方法。玻璃器皿的清
一、細胞冷凍保存1、材料：生長良好之培養細胞、新鮮培養基、DMSO（Sigma D-2650）、無菌塑料冷凍保存管（Nalgene 5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球計數盤與蓋玻片、等速降溫機（KRYO10SeriesI
14、DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？冷凍保存使用之DMSO 等級， 必須為Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)， 其本身即為無菌狀況， 第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中， 保存于4°C， 避免反復冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質，
1 冷凍管應如何解凍？ 取出冷凍管后， 須立即放入37 °C 水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時， 必須注意安全， 預防冷凍管之爆裂。2 細胞冷凍管解凍培養時， 是否應馬上去除DMSO？&
一、細胞冷凍保存1、材料：生長良好之培養細胞、新鮮培養基、DMSO（Sigma D-2650）、無菌塑料冷凍保存管（Nalgene 5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球計數盤與蓋玻片、等速降溫機（KRYO10S
大容量冷凍細胞離心機的類型有多種。1、按分離目的可分：實驗室大容量冷凍細胞離心機和工業大容量冷凍細胞離心機。2、按分離功能可分：大容量冷凍細胞分析離心機和大容量冷凍細胞制備離心機。3、按結構可分：臺式大容量冷凍細胞離心機和落地式大容量冷凍細胞離心機。4、按轉子結構可分：水平轉子大容量冷凍細胞離心機和
細胞臺式冷凍離心機分類方法有多種。1、按速度可分：細胞臺式冷凍低速離心機和細胞臺式冷凍高速離心機。2、按分離規模可分：小型細胞臺式冷凍離心機和大型細胞臺式冷凍離心機。3、按分離目的可分：細胞化驗室臺式冷凍離心機和細胞工業臺式冷凍離心機。4、按分離功能可分：分析型細胞臺式冷凍離心機和制備型細胞臺式冷凍
細胞株(系)的使用，為醫學研究和測試工作帶來了極大的方便。但細胞的傳代是有限制的，長期連續傳代的細胞，不僅消耗大量的人力和物力，而且細胞的生長與形態等會有一定退變或轉化，因而細胞失去原有的遺傳特性，有時還會由于細胞污染而造成傳代中斷，種子丟失。因此，在實際工作中常需凍存一定數量的細胞，以備替換使用。
含DMSO的凍存液DMSO是最常用的滲透性冷凍保護劑，廣泛應用于細胞的冷凍保存。在細胞水平，DMSO除了是一種DNA致畸因子外，還可滲入細胞內，分子中S=O鍵可能與細胞內蛋白發生化學反應，致使蛋白變性。因此，有些細胞和組織細胞對DMSO敏感，使用含DMSO的細胞冷凍液會降低細胞復蘇后活性，進而影響細
16 細胞欲冷凍保存時， 細胞冷凍管內應有多少細胞濃度?冷凍管內細胞數目一般為1x106 cells/ml vial， 融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。17 應如何避免細胞污染?細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉漿菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室
近日，明星徐靜蕾接受專訪時表示，她早在2013年就在美國冷凍了自己的9顆卵子，從而將冰凍卵子的話題再一次推進大眾視野，引發了社會對“凍卵“的關注和討論。 八月十一日，發表在國際著名醫學期刊《JAMA》（美國醫學會雜志）的一項研究表明，相比較使用新鮮的卵母細胞（卵子），用2013年收集冷藏（凍）
大容量冷凍細胞專用離心機類型有多種。1、按分離目的可分：化驗室大容量冷凍細胞專用離心機和工業大容量冷凍細胞專用離心機。2、按分離功能可分：分析型大容量冷凍細胞專用離心機和生產型大容量冷凍細胞專用離心機。3、按分離方法可分：大容量冷凍細胞專用濃縮離心機和大容量冷凍細胞專用澄清離心機。4、按速度可分：低
大容量冷凍細胞專用離心機類型有多種。1、按分離目的可分：化驗室大容量冷凍細胞專用離心機和工業大容量冷凍細胞專用離心機。2、按分離功能可分：分析型大容量冷凍細胞專用離心機和生產型大容量冷凍細胞專用離心機。3、按分離方法可分：大容量冷凍細胞專用濃縮離心機和大容量冷凍細胞專用澄清離心機。4、按速度可分：低
大容量冷凍細胞專用離心機類型有多種。1、按分離目的可分：化驗室大容量冷凍細胞專用離心機和工業大容量冷凍細胞專用離心機。2、按分離功能可分：分析型大容量冷凍細胞專用離心機和生產型大容量冷凍細胞專用離心機。3、按分離方法可分：大容量冷凍細胞專用濃縮離心機和大容量冷凍細胞專用澄清離心機。4、按速度可分：低
44、細胞冷凍管解凍培養時， 是否應馬上去除DMSO？ 除少數特別注明對DMSO 敏感之細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）， 在解凍之后， 應直接放入含有10-15 ml新鮮培養基之培養角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附
11 欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速?欲回收動物細胞， 其離心速率一般為300xg (約1,000rpm)，5 - 10 分鐘， 過高之轉速， 將造成細胞死亡。12 細胞之接種密度為何?依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生
26、PFHM-II 和HYBRIDOMA-SFM之間有什么差別？ PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白質的單克隆抗體生產培養基。如果作為雜交瘤生產培養基使用，PFHM-II可能需要補充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM即是雜交瘤生產培養
日本的一個研究小組首次證明了在沒有冷凍保護劑（CPA）的情況下保存冷凍動物細胞。為了使細胞存活，所有傳統的冷凍方法都需要添加CPA，但CPA可能具有潛在毒性，并與細胞損傷和死亡有關。 新方法只依賴于超快速冷卻——或者說真正的快速冷凍——在冷凍過程中保持細胞和重要的生命物質。沒有CPA的安全冷凍
一、細胞冷凍保存1、材料：生長良好之培養細胞、新鮮培養基、DMSO（Sigma D-2650）、無菌塑料冷凍保存管（Nalgene 5000-0020）、0.4％（w/v）trypan blue（GibcoBRL15250-061）、血球計數盤與蓋玻片、等速降溫機（KRYO10SeriesII）。2
細胞低溫冷凍貯存是細胞室的常規工作。細胞凍存與細胞傳代保存相比可以減少人力、經費，減少污染，減少細胞生物學特性變化。一、凍存和復蘇的原則：慢凍快融當細胞冷到零度以下，可以產生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質濃度升高，并在細胞內形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細胞逐步脫水，細胞內不致產生大的冰晶；相