蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
實驗方法原理 等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場中移動；當蛋白質遷移至其等電點位置時，其靜電荷數為零，在電場中不再移動，據此將蛋白質分離。 實驗材料 蛋白質樣品 試劑、試劑盒 丙稀酰胺 雙－丙稀酰胺 載體兩性電解質 尿素......閱讀全文
等電聚焦凝膠電泳原理
等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場中移
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術可應用于：(1)蛋白質的分離提純；（2）蛋白質組學研究。實驗方法原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的p
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗原理蛋白質分子是典型的兩性電解質分子。它在大于其等電點的 pH 環境中解離成帶負電荷的陰離子，向電場的
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
實驗方法原理 實驗原理蛋白質分子是典型的兩性電解質分子。它在大于其等電點的 pH 環境中解離成帶負電荷的陰離子，向電場的正極泳動，在小于其等電點的 pH 環境中解離成帶正由荷的陽離子，向電場的負極泳動。這種泳動只有在等于其等電點的 pH 環境中，即蛋白質所帶的凈電荷為零時才能停止。如果在一個
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
等電聚焦（Isoelectric focusing，簡稱 IEF）是六十年代中期出現的新技術。近年來等電聚焦技術有了新的進展，已迅速發展成為一門成熟的近代生化實驗技術。目前等電聚焦技術已可以分辨等電點（pI）只差 0.001pH 單位的生物分子。由于其分辨力高，重復性好，樣品容量大，操作簡便迅速，在
聚丙烯酰胺凝膠平板等電聚焦電泳測定蛋白質等電點
一、目的：學習聚丙烯酰胺凝膠平板等電聚焦電泳測定蛋白質等電點的原理及方法。二、原理：等電點聚焦（isoelectric focusing, IEF）或簡稱電聚焦（electrofocusing），也曾稱等電點分離聚焦電泳等。它是60年代中期出現的技術，克服了一般電泳易擴散的缺點。近年來，等電點聚
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
5.電泳操作步驟：1）將蛋白樣品于等體積的2×上樣緩沖液混合，10000×g離心5min以除去蛋白質沉淀；2）用微量注射器將蛋白質樣品加入到上樣空底部，注意不要溢出來。注意：對于考馬斯亮藍染色液來說，每個泳道10-30ug的蛋白混合粗提物（我們俗稱粗抗原）或者5-10ug單一蛋白組分是較合理的上樣濃
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（四）
9．其他要注意的事項1）等電聚焦后可用一根染色的細線（0.1mm）標出染料前沿的位置；2）不同品牌的載體兩性電解質性質上有細微的差別，使用不同來源的載體兩性電解質凝膠時候蛋白質分離樣式略有差異，若要獲得好的重復性一般不要更換載體兩性電解質的品牌；3）通常，窄范圍的pH梯度可以提高分辨率，但是需要時間
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（一）
1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在
雙向凝膠電泳的等電聚焦相關介紹
蛋白質是兩性分子，在不同的pH環境中可以帶正電荷、負電荷或不帶電荷。對每個蛋白質來說都有一個特定的pH，此時蛋白質的靜電荷為零，此pH值即該蛋白質的等電點(pI)。將蛋白質樣品加載至pH梯度介質上進行電泳時，它會向與其所帶電荷相反的電極方向移動。在移動過程中，蛋白分子可能獲得或失去質子，并且隨著
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（一）
原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（三）
8.常見問題及解釋1） 若產生模糊條帶則證明聚焦不完全，這可能是由于電泳中的問題或大分子蛋白質限制了其在凝膠中的遷移能力。若聚焦時間過長或過短，條帶的分辨率會下降。增加電壓梯度可以使帶形更加銳利。高分子量蛋白質在瓊脂糖凝膠中可以聚焦的更好。2） 產生歪斜的條帶通常由于不正確的pH梯度，檢查電極是否潔
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
6．電泳聚焦后處理測定pH梯度：1）將凝膠條切成0.5cm或1cm的小片；2）將每小片凝膠在1ml 10mM KCl中 浸泡30min；3）測讀此KCl溶液的pH值、凝膠的固定：1）將凝膠于10%三氯乙酸中浸泡10min；2）換成1%三氯乙酸溶液繼續浸泡至少2h以上，以去除載體兩性電解質，浸泡過夜可
等電點聚焦電泳
中文名稱等電點聚焦電泳英文名稱isoelectric focusing electrophoresis定 義一種根據蛋白質等電點不同而將蛋白質在凝膠介質中分離的電泳方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
蛋白質技術專題：蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
8.常見問題及解釋1） 若產生模糊條帶則證明聚焦不完全，這可能是由于電泳中的問題或大分子蛋白質限制了其在凝膠中的遷移能力。若聚焦時間過長或過短，條帶的分辨率會下降。增加電壓梯度可以使帶形更加銳利。高分子量蛋白質在瓊脂糖凝膠中可以聚焦的更好。2） 產生歪斜的條帶通常由于不正確的pH梯度，檢查電極是否潔
蛋白質技術專題：蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
1） 若產生模糊條帶則證明聚焦不完全，這可能是由于電泳中的問題或大分子蛋白質限制了其在凝膠中的遷移能力。若聚焦時間過長或過短，條帶的分辨率會下降。增加電壓梯度可以使帶形更加銳利。高分子量蛋白質在瓊脂糖凝膠中可以聚焦的更好。 2） 產生歪斜的條帶通常由于不正確的pH梯度，檢查電極是否潔凈，是
蛋白質技術專題：蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（一）
等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 樣品緩沖液 羥乙基二硫化物 細胞裂解緩沖液
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗
對于復雜混合物，如全細胞裂解物或富集的亞細胞組分，通過兩步正交的分離 (orthogonalseperation)，二維凝膠 (2D 膠）電泳可以很好地分離成幾百個至上千個單個蛋白質。第一次分離基于電荷，即使用變性等電聚焦電泳; 第二次分離基于表觀分子質量，即使用變性十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電
等電聚焦電泳（IEF）分離蛋白及測定蛋白質等電點
一、原理等電點聚焦（IEF）是在電場中分離蛋白質技術的一個重要發展，等電聚焦是在穩定的pH梯度中按等電點的不同分離兩性大分子的平衡電泳方法。在電場中充有兩性載體和抗對流介質，當加上電場后，由于兩性載體移動的結果，在兩極間逐步建立穩定的pH梯度，當蛋白質分子或其他兩性分子存在于這樣的pH梯度中時，這種
制備電泳實驗——等電聚焦制備電泳
實驗方法原理等電聚焦制備電泳是一種非變性制備技術。由于等電聚焦電泳技術的特點，因而是一種理想的制備方法。試劑、試劑盒電極液兩性電解質Ultrodex實驗步驟一、液體介質垂直柱狀蔗糖密度梯度等電聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制備和分析目的的等電聚焦方法。載體兩性電解質在蔗糖密度梯度柱中形成 pH
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗（二）
SDS-PAGELaemmli(1970) 描述的 SDS-PAGE 在很長一段時間內作為各種生化分析中分辨完整蛋白質的備選方法。這主要是因為對于疏水性很強的蛋白質,SDS 是最好的增溶去污劑，所有的蛋白質，包括堿性很強的蛋白質，都向同一方向移動, 分離取決于各自的表觀分子質量 (通常稱為分
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗（三）
二、方法蛋白質樣品制備穩定的樣品制備對于任何成功的生物分析性測定都是至關重要的。為了增加實驗的重復性, 并將預期外的變異降至最小，使用的緩沖液和材料都應該是質量最好的，并且在采購時需特別小心。應該使用小分子蛋白酶和磷酸酶抑制劑，如抑肽酶 (aprotinin)、亮抑肽酶 (Ieupeptin
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗（四）
再水化上樣是二維凝膠電泳樣品導入的最簡便方法，這一方法使得樣品緩沖液中的蛋白質樣品在 IPG 膠條吸收樣品溶液時被動導入，且蛋白質可以在整個 pH 梯度中均勻分布。在一些商品化的等電聚焦儀器中，IPG 膠條的再水化和聚焦可以用相同設備儀器完成，無需人工操作。這種儀器也可以進行所謂的主動再水化
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗（一）
試劑、試劑盒 樣品緩沖液羥乙基二硫化物細胞裂解緩沖液SDS-PAGE 現成溶液二硫蘇糖醇碘乙酰胺儀器、耗材 等電聚焦電泳系統二維SDS-PAGE 多凝膠系統恒溫循環器IPG 干膠條溶脹盤上樣杯旋轉搖動混合器實驗步驟 一、等電聚焦的基本原理等電聚焦 (IEF) 是一種能根據分子內的質子接受點的 p
蛋白質的雙向電泳實驗_等電聚焦法
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦( Isoelect rofocusing, IEF) , 根據蛋白質的等電點不同進行分離; 第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳( SDS-PAGE ) , 按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后, 可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。本實驗目的是
等電點聚焦電泳的定義
中文名稱等電點聚焦電泳英文名稱isoelectric focusing electrophoresis定 義一種根據蛋白質等電點不同而將蛋白質在凝膠介質中分離的電泳方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）