用BRET方法研究活細胞中GPCR蛋白相互作用的基本注意事項2
BRET融合結構的生產構成編碼BRET融合蛋白包括以下內容：1. 表達Rluc-EYFP融合蛋白的BRET融合結構的陽性對照（見注2）。2. BRET結構的陰性對照：如：單獨表達Rluc和EYFP的pRluc, pEYFP，GPCRs對照（非感興趣的GPCR）和其他融合了Rluc或者EYFP的蛋白，（見注3）。在我們的研究中，我們利用促性腺激素釋放激素（GnRH）促甲狀腺激素釋放激素（TRH）和β2腎上腺素受體，他們都是C末端和Rluc和EYFP結合（見注3）。3. 首個感興趣的蛋白的BRET供體結構，（C末端（GPCR/Rluc）或者N末端（Rluc/GPCR）標記為Rluc的GPCR的表達）（見注4-6）。4. 第二個感興趣的蛋白的BRET受體結構（C末端（GPCR/EYFP）或者N末端（EYFP/GPCR）標記為EYFP的GPCR的表達）（見注4-6）。 BRET融合結構的......閱讀全文
用BRET方法研究活細胞中GPCR蛋白相互作用的基本注意事項2
BRET融合結構的生產構成編碼BRET融合蛋白包括以下內容：1.?表達Rluc-EYFP融合蛋白的BRET融合結構的陽性對照（見注2）。2.?BRET結構的陰性對照：如：單獨表達Rluc和EYFP的pRluc, pEYFP，GPCRs對照（非感興趣的GPCR）和其他融合了Rluc或者EYFP的蛋白，
用BRET方法研究活細胞中GPCR蛋白相互作用的基本注意事項1
簡介： BRET已經成功的應用于研究哺乳動物細胞中GPCR同源和異源二聚體以及涉及到受體脫敏作用和交易的受體/β-arrestin相互作用（綜述，1）。BRET的顯著優勢是可以在活細胞中，正確的的位置實時的監測蛋白質和蛋白質之間的相互作用。由于GPCR高度的疏水性和細胞本地化，測量蛋白質之間相互作用
用BRET方法研究活細胞中GPCR蛋白相互作用的基本注意事項3
圖2A：測量Rluc表達的發光模塊的設置。雙擊“Read options”對話框下“Measurement”標簽左側的“lumin label”圖2A：測量Rluc表 圖2B：EYFP表達的熒光模塊的設置，雙擊“Read options”對話框下“Measurement”標簽左側的“fluor l
smFRET檢測GPCR調控下游蛋白arrestin的構象分布研究獲進展
G蛋白偶聯受體（GPCR）是目前已知的人類基因組中最大的膜蛋白家族，約30%的臨床處方藥的直接靶點是GPCR，負責80%左右的跨膜信號轉導，參與調控人體中多數病理與生理過程。GPCR主要通過G蛋白及arrestin將細胞外的刺激轉變為細胞內信號。近年來，結構生物學研究方法的進步為研究GPCR及其
發現GPCR磷酸化編碼機制，創新性的提出“笛子模型”理論
中國科學院生物物理研究所研究員王江云課題組、山東大學基礎醫學院教授于曉團隊與孫金鵬團隊，與北京大學教授金長文團隊合作，在Nature Communications上在線發表了研究論文Structural studies of phosphorylation-dependent interacti
方案2－細胞裂解液中相互作用蛋白的親和純化
實驗材料培養的細胞系探針蛋白、重組表達或化學合成的肽探針試劑、試劑盒考馬斯亮藍乙醇胺-HCl磷酸鹽緩沖液疊氮化鈉裂解緩沖液2 X SDS-PAGE 凝膠上樣緩沖液SDS-PAGE 梯度凝膠Na3PO4儀器、耗材水浴鍋或電加熱塊層析柱透析膜凝膠電泳儀微型離心機微量離心管管式混合器解剖刀紫外分光光度計實
均相高通量方法在活細胞GPCR功能性和表面受體...（一）
均相高通量方法在活細胞GPCR功能性和表面受體結合試驗中的研究介紹：G蛋白偶聯受體（GPCR）是目前已知細胞表面受體家族中最大的一個分支，目前的藥物篩選中有40%是針對GPCR進行的。先導化合物的篩選過程中，首先要針對這些潛在藥物（化合物）進行療效的評估（例如在心血管疾病及其它領域），如果想充分了解
兩研究組揭示EGFR蛋白在活細胞質膜中的分布規律
2014年7月8日， 國際學術期刊Cell Research在線發表了中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所季紅斌研究組、許琛琦研究組與中國科學院長春應用化學研究所王宏達研究組的合作研究論文——"Regulation of EGFR nanocluster formation b
蛋白質間相互作用研究方法2：免疫共沉淀
相互作用在生理上的證實和探索l? 通過免疫共沉淀確定結合蛋白1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養板上的適宜細胞。刮去每塊板上的細胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中。2．將每毫升細胞懸液轉移到微量離心管中，在微量離心機上4℃以最大速度離心15 min。3．收集上清（約30 ml）并加入3
廣州健康院發現內涵體上GPCRG蛋白信號轉導的分子調控新機制
中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院揭示了分選轉運蛋白SNX25通過氧化還原依賴的方式調控內涵體GPCR-G蛋白信號轉導的分子機制。相關研究成果以Redox-Modulated SNX25 as a Novel Regulator of GPCR-G Protein Signaling from En
內涵體G蛋白信號終止的分子調控機制獲揭示
近日，中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院研究員徐進新和客座研究員劉勁松團隊研究揭示了分選轉運蛋白SNX25通過氧化還原依賴的方式調控內涵體G蛋白偶聯受體（GPCR）-G蛋白信號轉導的分子機制。相關成果在線發表于《氧化還原生物學》（Redox Biology）。 最近十幾年來，越來越多的研究表明
內涵體G蛋白信號終止的分子調控機制獲揭示
近日，中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院研究員徐進新和客座研究員劉勁松團隊研究揭示了分選轉運蛋白SNX25通過氧化還原依賴的方式調控內涵體G蛋白偶聯受體（GPCR）-G蛋白信號轉導的分子機制。相關成果在線發表于《氧化還原生物學》（Redox Biology）。SNX25調控GPCR-G蛋白信號轉導的
Cell：闡明活細胞中蛋白質凝縮的新工具
一種利用光來控制活細胞內物質的工具，已經開始為我們解釋“蛋白質如何組裝成不同的液體和凝膠狀固態”，這對于理解許多關鍵的細胞運轉，是至關重要的。延伸閱讀：Science：新結構揭示細胞的蛋白質生產機器是如何組裝的。 由于極大的復雜性，宿主細胞會同時發生成千上萬的化學反應。一些反應發生在專門的隔間
蛋白純化后，緩沖中的咪唑是否影響細胞測活？
如果你要測活的話，最好要先對你純化的蛋白進行除鹽，去除小分子干擾物。除鹽，去除小分子干擾物的方法有很多，這里我就說說適合你的方法。第一，因為你手頭上有超濾管，這個東西除了能濃縮蛋白，還有一個很重要的功能就是更換緩沖液，去除小分子。你選用3KD的超濾管，邊濃縮邊加入你測酶活想選擇的緩沖溶液，重復幾次的
活細胞蛋白質標記與成像研究獲進展
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/7/504935.shtm近日，華東理工大學光遺傳學與合成生物學交叉學科研究中心楊弋、朱麟勇、陳顯軍團隊在活細胞蛋白質標記與成像研究中取得重要進展，相關研究在《細胞發現》發表。 ???人造熒光蛋白及熒光
上海藥物所發現GPCR與GPCR激酶相互作用新機制
GPCR（G蛋白偶聯受體）已經成為當前最成功的藥物靶標之一，迄今已有40%左右的上市藥物以GPCR為靶點，因此，在藥物發現領域，對GPCR結構及其如何與下游信號通路相互作用的認識與理解越深入，則越有希望開發出更加高效低毒的藥物。自GPCR與下游G蛋白和阻遏蛋白復合物晶體結構被成功解析以來，GPC
化學所在活細胞分子探針研究中取得系列進展
分子識別是生命過程的基礎，揭示生物活性分子間識別作用是透徹理解生命過程的重要途徑。發展新型識別分子、構筑分子探針，在分子水平上探索生命過程和疾病發生發展機制是現代生化分析領域前沿研究方向之一。 中國科學院化學研究所活體分析化學院重點實驗室上官棣華課題組科研人員長期致力于分子探針的開發和分子識別
活細胞的鑒別方法
區分死細胞和活細胞的方法有 ①、活細胞能發生質壁分離而死細胞則不能。②進行培養，活細胞能繁殖，死細胞則不能，光鏡下觀察有多個細胞。③、進行染色，死活細胞呈現不同的結果④、直接觀察細胞結構。
活細胞的鑒別方法
區分死細胞和活細胞的方法有 ①、活細胞能發生質壁分離而死細胞則不能。②進行培養，活細胞能繁殖，死細胞則不能，光鏡下觀察有多個細胞。③、進行染色，死活細胞呈現不同的結果④、直接觀察細胞結構。
活細胞成像用哪種顯微鏡
活細胞成像可以選擇共聚焦顯微鏡，共聚焦與傳統顯微鏡的原理差別在于照明方式不同：傳統顯微鏡是一次性照明整個視野中的樣品，因此可以用眼睛直接觀察或者用CCD獲取圖像，沒有時間延遲；而共聚焦顯微鏡是逐點成像，無法用CCD獲取圖像，只能用探測器收集每個象素點的信號，再通過軟件重構圖像，有一定的時間延遲。共聚
2012蛋白質－配體弱相互作用研究的技術與方法國際研討會
2012 年 10 月30日 (中國， 上海)--專注于提高人類健康及其生存環境安全的全球領先企業珀金埃爾默(PerkinElmer )公司10月參加了由中國生物物理學會分子生物物理專業委員會和美國生物物理學會于14-18 日在北京友誼賓館舉辦的2012 蛋白質-配體弱相互作用研究的技術
無需活細胞的蛋白合成新技術
來自美國能源部橡樹嶺國家實驗室（Oak Ridge National Laboratory）的研究人員研發出了一種無需細胞培養，人工合成蛋白質的新系統，這一研究成果公布在12月22日的Small雜志上。 這個生物反應器采用的是一種混合液，其中包含有大腸桿菌細胞提取物，一種綠色熒光蛋白DNA編碼
無需活細胞的蛋白合成新技術
來自美國能源部橡樹嶺國家實驗室（Oak Ridge National Laboratory）的研究人員研發出了一種無需細胞培養，人工合成蛋白質的新系統，這一研究成果公布在12月22日的Small雜志上。 這個生物反應器采用的是一種混合液，其中包含有大腸桿菌細胞提取物，一種綠色熒光蛋白DNA編碼
武漢病毒所建立研究活細胞內蛋白質互作的新方法
近日，中國科學院武漢病毒研究所/病毒學國家重點實驗室胡志紅、王曼麗研究團隊在蛋白質相互作用的研究方法方面取得新進展，相關研究成果以Mito-docking: A novel in vivo method to detect protein-protein interactions（《線粒體錨定：
利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達（二）
結果波長優化用GeminiEM對DsRed進行波長掃描，以此舉例如何進行波長優化。為了檢測最大激發波長，我們首先固定發射波長為600nm，然后對發射波長進行掃描。掃描結果顯示最大激發波長為556nm(圖1)。同樣為了檢測最大發射波長，我們固定激發波長為535nm，然后掃描發射波長，從而得到584nm
利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達（三）
細胞混合結果在本次實驗中，我們在一個96孔板里混合了多種細胞，保證每個孔大約50,000個細胞。因此，如果是1:1混合，那么每種細胞會有25,000個。如果是1:1:1混合，那么每種細胞將有16,700個。實驗板分別用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的優化結果)和550/588nm(D
利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達（一）
簡介在過去的五年中，熒光蛋白在監測體內生物學研究中，起到越來越重要的作用。源于維多利亞多管發光水母中的綠色熒光蛋白(GFP)是最早被我們應用的熒光蛋白，但是隨著時間的推移，現在我們可以使用的熒光蛋白種類也越加豐富，包括加強型的變異GFP蛋白、從其他種類水母中發現的熒光蛋白和珊瑚礁蛋白。它們都可以在眾
活細胞工作站在哺乳動物卵母細胞中獨特的組蛋白成分...
活細胞工作站在哺乳動物卵母細胞中獨特的組蛋白成分H1foo的表觀遺傳學功能研究中的應用一、研究背景?大部分哺乳動物的組蛋白都以序列特異性的方式結合到DNA的連接序列上，連接處的核小體會因此產生高度有序的染色質結構來精確的調節基因的表達。H1foo是卵細胞中特異表達的組蛋白H1家族成員，從減數分裂胚泡
LVF光柵在FRET和BRET分析中的優異表現
在多功能酶標儀中，為了分離某一特定波長的單色光我們有兩種技術選擇——濾光片或者光柵。與光柵相比，濾光片系統往往具有更好的靈敏度，因為濾光片具有更好的透光率和更寬的帶寬。而光柵系統的好處是可以提供波長選擇的靈活性，不需要購買或安裝特定波長的濾光片。盡管如此，很多用戶都發現許多應用在光柵系統上達不到理想
冷凍電鏡在GPCR藥物發現中的突破性研究
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/3/518951.shtm近日，中國科學院上海藥物研究所徐華強/段佳團隊探討了冷凍電鏡（Cryo-EM）在理解和開發以G蛋白偶聯受體（GPCRs）為靶點藥物的革命性影響，相關綜述發表于《自然評論—內分泌學》。文