濾膠過濾層析法蛋白質的純化實驗
凝膠過濾層析法 實驗方法原理 凝膠過濾層析是根據蛋白質分子大小不同而達到分離效果的，凝膠過濾填料中含有大量微孔，只允許緩沖液及小分子量蛋白質通過，而大分子蛋白質及一些蛋白復合物則被阻擋在外。因此，高分子量的蛋白質在填料顆粒間隙中流動，比低分于量蛋白更早地被洗脫下來。最大的蛋白質分子最早流出柱子，因為它們在到達柱底前經過的體積最小。中等大小的蛋白質可以進人填料分子中較大的孔內，因此它們晚一些到達柱底，而小蛋白質可以逬人所有填料的孔內，有最大的通過體積，故最后到達柱底。 實驗材料 蛋白質溶液 ......閱讀全文
濾膠過濾層析法蛋白質的純化實驗_凝膠過濾層析法
凝膠過濾層析是一項重要的蛋白質純化技術，又稱為大小排阻、凝膠排阻、分子篩或凝膠過濾層析這種方法利用分級分離，而不需要蛋白質的化學結合，這就明顯降低了因不可逆結合所致的蛋白質損失和失活。另外，可利用此法更換蛋白質的緩沖液或降低緩沖液的離子強度。在蛋白質純化操作中何時使用凝膠過濾，還不能一概而論，有時純
濾膠過濾層析法蛋白質的純化實驗
實驗方法原理 凝膠過濾層析是根據蛋白質分子大小不同而達到分離效果的，凝膠過濾填料中含有大量微孔，只允許緩沖液及小分子量蛋白質通過，而大分子蛋白質及一些蛋白復合物則被阻擋在外。因此，高分子量的蛋白質在填料顆粒間隙中流動，比低分于量蛋白更早地被洗脫下來。最大的蛋白質分子最早流出柱子，因為它們在到達柱底前
濾膠過濾層析法蛋白質的純化實驗
凝膠過濾層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凝膠過濾層析是根據蛋白質分子大小不同而達到分離效果的，凝膠過濾填料中含有大量微孔，只允許緩沖液及小分子量蛋白質通過，而大分子蛋白
蛋白質分離純化方法之凝膠過濾層析法
在停止蛋白質研討時，首先需求選擇一套適宜的蛋白別離和蛋白純化辦法來獲取高純度的生物制品，來停止下一步的研討。由于蛋白質具有顆粒大且不同蛋白質分子大小不同等特性，因而能夠依據蛋白質分子大小不同而停止別離，這種別離辦法有透析、超濾、離心和凝膠過濾，常包含在一些蛋白別離公司的效勞中。凝膠過濾是依據分子
疏水作用層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 在疏水層析的主要支持介質上含有大小不等的疏水側鏈，烷基或芳香基，可是絕大多數情況起作用的是苯基或辛基。當碳氫鏈長度增加，即變得更疏水時，疏水強的少量蛋白質被吸附。這時疏水相互作用太強，需用極端方法洗脫，可能會導致蛋白質變性。苯基瓊脂糖比辛基瓊脂糖疏水性低，是疏水純化中效果不錯的常用介質
疏水作用層析法純化蛋白質實驗
疏水相互作用層析是以介質疏水基團和蛋白質疏水區域間的親和作用為基礎的。疏水力是浸在一種極性液體（如水）中的非極性物質的排斥力。胞膜蛋白都具有一個明顯的疏水區域以錨定在膜上。可溶性蛋白質在外表面上可能存在疏水小區，它促進蛋白復合物的形成，也可能是疏水配基結合部位或活性部位。這些暴露的疏水區對疏水層析純
疏水作用層析法純化蛋白質實驗
疏水作用層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在疏水層析的主要支持介質上含有大小不等的疏水側鏈，烷基或芳香基，可是絕大多數情況起作用的是苯基或辛基。當碳氫鏈長度增加，即變得更
蛋白質的表達、分離、純化實驗——層析法
蛋白質表達、分離、純化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理；（2）供作結構與功能的研究；（3）作為催化劑、營養劑等。實驗方法原理攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共
蛋白質的純化實驗——膠體過濾法
不同大小的蛋白質分子進入膠體過濾管柱，可依其分子量差異分離；是一種廣泛應用的蛋白質partition色析法 。實驗材料Sephacryl S-300膠體試劑、試劑盒緩沖液buffer A-150儀器、耗材色析管柱鐵夾試管鐵架水平儀收集器濃縮用離心機?濃縮用離心管實驗步驟一、儀器設備色析管柱 （Pha
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通過它們本身的堿基實現的。從理論上講，該方法也許干擾最佳結合序列的接近路徑，但是這樣一個簡單的方法一直被廣泛地成功應用。偶聯效率的定量檢測可經 A260 值測定評估，或者更精確地從偶聯介質上水解核酸和進行磷酸鹽測定。實
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
步驟一 偶聯寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步驟二 核酸親和層析 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4
染料配基層析法純化蛋白質實驗
染料配基法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 選擇純化特異蛋白質的適宜染料一般是通過反復試驗比較后決定。Cibacron Blue F3GA，作為該領域的先驅染料與煙酰胺腺嘌
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換（指與蛋白質末端離子的交換）；固定在樹脂上。通過提高溶液中相反離子濃度或降低蛋白質所帶電荷數等方法可將蛋白質從樹脂上洗脫下來。利用此法，可根據不同蛋白質電荷性質不同而將其分離開來。若已
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
離子交換層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換（指與蛋白質末端離子的交換
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
離子交換層析在純化蛋白質的層析手段中使用最為廣泛。它對蛋白質的分辨率高，操作簡易，重復性好，成本低。按照離子交換原理，蛋白質可從大量緩沖性溶液中被分離，所以此方法尤適于蛋白質粗提物的初始純化。在分離蛋白質時，速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分離和不穩定蛋白質的純化。離子交換層析提供了很多加速分離
凝膠過濾層析法測定蛋白質分子量實驗_凝膠過濾層析法
凝膠過濾也稱排阻層析、分子篩層析和凝膠層析。本實驗目的是了解凝膠過濾層析法測定蛋白質分子量的基本原理，鞏固柱層析的操作方法。實驗方法原理凝膠過濾( Gel Filt ration ) 也稱排阻層析( Exclusion Chromatography)、分子篩層析(Molecular Sieve Ch
核酸親和層析法純化蛋白質實驗1
核酸親和柱的應用極大地促進了核酸結合調節蛋白特性的研究，這些蛋白質涉及基因表達、染色體修復和復制、基因重組等的調控。核酸結合蛋白可以結合單鏈 DNA、雙鏈 DNA 或 RNA。DNA 結合蛋白結合 DNA 可以是序列特異的，也可以是非特異的。此外，含有特異寡核苷酸的親和樹脂能用于某些酶的分離，這些酶
核酸親和層析法純化蛋白質實驗2
核酸親和層析實驗材料樣品蛋白質試劑、試劑盒平衡緩沖液（Tris-HClKClEDTA）非特異 DNA實驗步驟在上樣品液到核酸親和柱之前，建議首先采用其他的純化方法，如硫酸銨沉淀、離子交換或凝膠過濾層析等富集目的蛋白。這樣可以除去絕大多數的污染物，并減少非特異結合。親和層析柱一般來講是短而粗的，例如長
染料配基層析法純化蛋白質實驗——染料配基法
染料配基層析不是真正意義的親和層析，因為它們并不是與它們結合的蛋白質的天然配基。然而染料柱能很好地結合蛋白質，并能導致滿意地純化蛋白質。事實上，有時這種結合甚至比正常的配基更緊。染料配基柱通常是廉價和穩定的，并且具有較高的蛋白質結合容量。所以染料配基層析能作為蛋白質純化中有價值的步驟之一。來源：《蛋
蛋白質純化親和層析法
若表達蛋白質上含有一段六個His 的片段，而親和吸附膠上接有鎳離子，此蛋白質會特異性地結合到吸著膠體；洗去雜質后可imidazole 洗脫目標蛋白質。（Pharmacia 操作手冊， Affinity Chromatography）。儀器設備：親和層析管柱 （Bio-Rad 731-1550 Pol
蛋白質凝膠過濾層析實驗
凝膠過濾層析（也叫分子篩）是利用具有多孔網狀結構的顆粒的分子篩作用，根據被分離樣品中各組分相對分子質量大小的差異進行分離的技術。 凝膠過濾層析（GF）法又稱為排阻層析或分子篩方法，主要是根據蛋白質的大小和形狀，即蛋白質的質量進行分離和純化。層析柱中的填料是惰性的多孔網狀結構物質，多是交聯的聚糖
凝集素親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 用于親和層析的凝集素應根據它們結合的特異性和緊密度加以選擇。例如，刀豆素 A（Con A）與糖蛋白含有的葡萄糖或甘露糖結合，而麥芽凝集素只與具 N-乙酰葡糖胺的蛋白質結合。胞膜糖蛋白常與麥芽凝集素結合，而可溶性糖蛋白卻通常用 Con A 或扁豆凝集素親和柱純化。由于在許多情
凝集素親和層析法純化蛋白質實驗
刀豆素 A 親和柱純化蛋白質 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用于親和層析的凝集素應根據它們結合的特異性和緊密度加以選擇。例如，刀豆素 A（Con A）與糖蛋白含有的葡萄糖
凝集素親和層析法純化蛋白質實驗
凝集素是能可逆性結合碳水化合物的蛋白質。因為絕大多數凝集素至少每個分子有兩個碳水化合物結合部位，所以它們可以沉淀糖蛋白和凝集細胞。凝集素也就可以用作糖蛋白的親和配基，具有單糖的糖蛋白可用溫和的蛋白質冼脫條件分離。雖然凝集素親和層折沒有很高的選擇性，但是無疑它已成為蛋白質純化的一種常用方法。它通常作為
蛋白質純化膠體過濾法
儀器設備：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、鐵架、鐵夾及水平儀；分劃收集器 （fraction collector, 需準備干凈試管約100 支）；濃縮用離心機 （低速5,000 rpm）；濃縮用離心管Centriprep-30 （Amicon 4322）
蛋白質純化膠體過濾法
實驗概要本實驗介紹了蛋白質純化膠體過濾法，不同大小的蛋白質分子進入膠體過濾管柱，可依其分子量差異分離。主要試劑1. 膠體Sephacryl S-300 (Pharmacia)：a. 預先以緩沖液buffer A-150 平衡好，并且使完全沉降后的膠體體積，占全部體積的七至八成；要先預估好膠體
蛋白質純化膠體過濾法
蛋白質純化膠體過濾法儀器設備：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、鐵架、鐵夾及水平儀；分劃收集器 （fraction collector, 需準備干凈試管約100 支）；濃縮用離心機 （低速5,000 rpm）；濃縮用離心管Centriprep-30 （Ami
蛋白質純化膠體過濾法
不同大小的蛋白質分子進入膠體過濾管柱，可依其分子量差異分離；是一種廣泛應用的partition色析法 （Pharmacia操作手冊， Gel Filtration）。儀器設備：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、鐵架、鐵夾及水平儀；部分收集器（fracti
蛋白質純化膠體過濾法
不同大小的蛋白質分子進入膠體過濾管柱，可依其分子量差異分離；是一種廣泛應用的partition色析法 （Pharmacia操作手冊， Gel Filtration）。儀器設備：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、鐵架、鐵夾及水平儀；部分收集器（fraction
固相化金屬親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 固相化金屬親和層析的原理是利用暴露的蛋白質殘基和介質上的金屬離子之間的相互作用進行純化。作為電子供體的表面氨基酸，特別是甘氨酸，與金屬離子螯合時，在金屬親和柱內含這些氨基酸殘基的蛋白質就受到阻滯。由于電子供體一定是未質子化的，至少部分是如此以便螯合金屬離子，所以越堿性的溶液蛋白質與金屬