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    2.1.6CsCl法從組織中提取RNA

    由于一些組織(如胰臟和睥臟)含有高濃度的內源性 RNA 酶,因此純化源于組織的 RNA 須更加小心。試劑、試劑盒液氮組織胍溶液十二烷基肌氨酸鈉CsCl組織重懸液乙酸鈉酚氯仿異戊醇異戊醇無水乙醇儀器、耗材組織搗碎機離心機實驗步驟一 材料與設備1)液氮2)組織胍溶液:590.8 g 異硫氰酸胍溶于 400ulDEPC 處理的水中,加入 25 mmol/LTris-Cl(pH7.5).20 ml0.5mol/LEDTA(pH8.0),攪拌過夜,加水至 950 ml,過濾, 最后加 50 ml,β-巰基乙醇。3)20%(m/V) 十二烷基肌氨酸鈉4)5.7mol/LCsCl5)組織重懸液:5 mmo/LlEDTA,0.5%(V/V) 十二烷基肌氨酸鈉,5%β-巰基乙醇6)3mol/L 乙酸鈉 pH5.27)酚:氯仿:異戊醇 (25:24:1),氯仿:異戊醇 (24:1)8)組織搗碎機9)離心機10)無水乙醇.二 操作方法1) 從動物體快......閱讀全文

    RNA提取心得(組織RNA提取和培養細胞的RNA提取)

    一.組織RNA提取 1.最好新鮮組織,這樣RNA提取的效果比較好,這是肯定的。 2. 如果不是新鮮的(最好在半年之內,-80℃或者液氮中凍存的)組織,注意不要反復凍融,從冰凍狀態拿到0-4℃,注意不要拿到常溫,待組織解凍后,用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織,稱重后,放到預冷的勻漿器中,然后

    RNA提取

    RNA提取(主要內容如下)Tips for Handing RNA?Total RNA IsolationmRNA IsolationrRNA IsolationOthersQ & A posted in the Method Forum??Basic Procedures for Handing

    總RNA提取(Trizol提取)

    在收集到生物材料之后,最好能即刻進行RNA 制備工作。若需暫時儲存,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA 時,將儲存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍,以避免RNase 的作用。1. 提取組織RNA 時,每50~100mg 組織用1ml

    RNA提取原理

    RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,內含異硫氰酸胍等物質,能迅速裂解細胞,抑制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成

    RNA的提取

    一、準備試劑:氯仿,異丙醇,75℅乙醇,無RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC處理過的水配制)。二、操作步驟:1. 勻漿處理:a. 組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。b. 單層培養細胞

    RNA提取原理

    RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,內含異硫氰酸胍等物質,能迅速裂解細胞,抑制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成

    RNA的提取

    【實驗原理】Trizol 試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA 的試劑。它在破碎和溶解細胞時能保持RNA 的完整性。加入氯仿后離心,樣品分成水樣層和有機層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后,RNA 可以通過異丙醇沉淀獲得。【實驗儀器】1. 勻漿機2. 低溫離心機3. 渦旋器【試劑及配制】1

    RNA提取時RNA降解原因

    1 ) 新鮮細胞: 裂解液的量不足,使得裂解不充分。 2 ) 新鮮組織: 某些含有內源性核酸酶的樣品,很難避免RNA酶的降解,建議采用的方法為在液氮條件下將組織研碎,并且,勻漿時采用更多的裂解液。 3 ) 冷凍樣品: 樣品取材后應該迅速置于液氮中冷凍存放,然后轉移到-70℃冰箱存

    核酸提取——RNA提取與DNA的提取

    核酸分為兩大類:一類為核糖核酸(RNA),另一類為脫氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量極大,從數萬到億萬。核酸是兩性化合物,在一定的等電點溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有機溶劑。細胞內的核酸常和蛋白質結合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質溶液中 的溶解度有顯著區別,在一定濃

    核酸提取——RNA提取與DNA的提取

    核酸分為兩大類:一類為核糖核酸(RNA),另一類為脫氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量極大,從數萬到億萬。核酸是兩性化合物,在一定的等電點溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有機溶劑。細胞內的核酸常和蛋白質結合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質溶液中 的溶解度有顯著區別,在一定濃

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