1.檢查母子ABO和Rh血型。
2.血液學檢查紅細胞及血紅蛋白，多數在正常范圍，血紅蛋白在100g/L以下者僅占5%左右，網織紅細胞常增多，重型病例有核紅細胞可達10%以上。紅細胞形態特點是出現球形紅細胞，而且紅細胞鹽水滲透脆性和自溶性都增加。
3.抗體測定：在新生兒紅細胞或血清中查出對抗其自身紅細胞的血型抗體是診斷ABO溶血病的主要實驗根據。一般進行3種試驗：第一是改良直接抗人球蛋白試驗：即改良Coombs試驗，測定患兒紅細胞上結合的血型抗體。用“最適稀釋度”的抗人球蛋白的血清與充分洗滌后的受檢紅細胞鹽水懸液混合，如有紅細胞凝聚為陽性，表明紅細胞已致敏。該項為確診試驗。
第二是抗體釋放試驗，測定患兒紅細胞上結合的血型抗體。用加熱的方法，使患兒致敏紅細胞結合的來自母體的血型抗體釋放于釋放液中，將該釋放液與同型成人紅細胞發生凝集，也為確診試驗。第三是血漿游離抗體測定，這是檢查患兒血清中來自母體的血型抗體。患兒血漿中加入與其相同血型的成人紅細胞，再加入抗人球蛋白血清，如有紅細胞凝聚為陽性。表明血清中存在游離AB或Rh血型抗體，可能與紅細胞結合引起溶血。用于估計是否繼續溶血和換血治療效果，但不是確診試驗。